플라이 클라이밍 분석: Drosophila melanogaster에서 일반 운동을 테스트하는 방법

초록

출처: Gevedon, O., et al. Drosophila melanogaster에서 새로운 신경 보호 유전자를 식별하기 위한 생체 내 순방향 유전자 검사. J. Vis. 특급 (2019).

이 비디오는 비행 이동을 정량화하는 간단한 방법을 설명하고 수행된 등반 분석을 보여줍니다. 비행 등반 분석은 음성 지오택시 반응에 의존하는 운동 기능의 일반적인 테스트입니다.

프로토콜

이 프로토콜은 Gevedon et al., In Vivo Forward Genetic Screen to Identify Novel Neuroprotective Genes in Drosophila melanogaster, J. Vis. Exp.(2019).

1. 등반 분석 (Ali et al., J. Vis. Exp. (2011년)

1. climbing assay를 검증합니다. 이 연구에서는 Elav^C155>UAS-Tau^R406W(낮은 등반 통과율 보임) 및 Elav^C155>UAS-GFP(대조군) 및 Elav^C155>UAS-mCherry(대조군) 파리를 사용하여 Ali 등이 이전에 설명한 방법론을 기반으로 등반 분석을 테스트합니다.
2. 파리를 한 번에 한 줄씩 테스트 챔버로 뒤집고(CO₂ 마취를 사용하지 마십시오) 5분 동안 회복되도록 합니다. 다른 날에 검사를 수행하는 경우 하루 중 같은 시간에 분석을 수행합니다. 이 연구에서는 운동에 대한 일주기 효과를 제어하기 위해 모든 등반 분석이 오후에 수행되었습니다.
   참고 테스트 시 파리를 직사광선에 노출시키지 마십시오. 이것은 등반 능력을 방해합니다.
3. 단단한 표면에 놓인 마우스 패드에 챔버(표시된 면이 아래로)를 강제로 3번 두드려 모든 파리가 바닥에서 분석을 시작하도록 합니다. 10초 동안 파리 이동을 관찰합니다.
4. 이 시간 내에 5cm 선에 도달하거나 통과하는 파리의 수와 테스트된 총 파리 수를 기록합니다. 각 시도 사이에 1분을 기다리면서 한 줄당 최소 3개의 시도 복제에 대해 프로토콜을 반복합니다.
   참고 본 연구에서 각 바이알에는 초기 스크리닝(수컷 파리)을 위해 2-19마리의 파리가 포함되어 있었고 교차된 암컷 라인의 돌연변이 결핍 분석을 위해 6-21
마리의 파리가 포함되어 있었습니다.

재료

이 논문에 사용된 재료 목록

이름	회사	카탈로그 번호	댓글
VWR® 초파리 바이알; 좁다	VWR	75813-160
VWR® 범용 실험실 라벨링 테이프	폭스바겐	89097-912
표준 마우스 패드
입체 스코프	모틱		모델 SMZ-168
초파리 인큐베이터	폭스바겐	89510-750
R 소프트웨어 패키지

년