출처: Morimoto, K. and Tamori, Y. Drosophila Imaginal Disc Epithelia에서 종양의 유도 및 진단. J. Vis. 특급 (2017).
초파리 상상 디스크를 염색할 때, 디스크가 노출되어 있지만 몸에 붙어 있는 부분을 거칠게 해부하는 경우가 많습니다. 염색이 완료되면 관심 디스크가 분리되어 장착됩니다. 예제 프로토콜은 날개 상상 디스크 해부 및 장착 절차를 보여줍니다.
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방법 논문
초파리 유충 상상 디스크 해부: 상피 발달을 관찰하는 방법
8.5K 조회수
⸱
2023년 4월 30일
이 논문에서
초록
프로토콜
이 프로토콜은 Morimoto and Tamori, Induction and Diagnosis of Tumors in Drosophila Imaginal Disc Epithelia, J. Vis. Exp. (2017)에서 발췌한 것입니다.
1. 유충 해부
- 나무 막대기나 뭉툭한 집게로 떠돌아다니는 세 번째 instar 유충을 수집하고, 형광 실체 현미경으로 적절한 형광 마커(예: EGFP)로 유전자형을 분석한 다음 PBS(인산염 완충 식염수)가 있는 해부 접시에 넣습니다.
- PBS에서 2mL 플라스틱 이송 피펫으로 피펫팅하여 유충을 세척합니다.
- 한쪽 집게로 유충의 중심을 꼬집고 다른 집게로 몸을 반으로 찢습니다.
- 한쪽 집게로 앞쪽 절반의 입 고리를 꼬집고 다른 집게로 입을 몸 쪽으로 밀어 몸을 뒤집습니다.
- 타액선이나 뚱뚱한 몸과 같은 불필요한 물질을 집게로 제거하십시오.
2. 고정 및 항체 염색
- 절개된 유충 몸체의 앞쪽 절반(상상의 날개 디스크 포함)을 1.5mL ....
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재료
| 이름 | 회사 | 카탈로그 번호 | 댓글 |
|---|---|---|---|
| 시약 | |||
| 인산염 완충 식염수(PBS) | 와코 | 162-19321 | |
| 트리톤X-100 | 와코 | Tel.: 168-11805 | |
| 포름알데히드 | 와코 | 제064-00406 | |
| 소 혈청 알부민 | 시그마 | A7906 | |
| 노멀 염소 세럼 | 시그마 | G6767 | |
| 장착 매체, Vectashield | 벡터 연구소 | H-1000 | |
| 다피 | 시그마 | D9542 | |
| 마우스 안티 Dlg 4F3 | 발달 연구 Hybridoma Bank | 4F3 디스크 방지 대형, RRID:AB_528203 | PBTG로 희석, 1:40 |
| 마우스 안티 MMP1 | 발달 연구 Hybridoma Bank | 3A6B4, RRID:AB_579780 | 3 1:1:1을 혼합하고 PBTG로 희석, 1:40 |
| 마우스 안티 MMP1 | 발달 연구 Hybridoma Bank | 3B8D12, RRID:AB_579781 | 3 1:1:1을 혼합하고 PBTG로 희석, 1:40 |
| 마우스 안티 MMP1 | 발달 연구 Hybridoma Bank | 5H7B11, RRID:AB_579779 | 3 1:1:1을 혼합하고 PBTG로 희석, 1:40 |
| 마우스 안티 아튜불린 | 발달 연구 Hybridoma Bank | AA4.3, RRID:AB_579793 | PBTG로 희석, 1:100 |
| 알렉사 플루어 546 팔로이딘 | 분자 프로브 | A22283 | PBS에서 희석, 1:40 |
| 염소 안티 마우스 IgG 항체, Alexa Fluor 546 | 분자 프로브 | A11030 | PBTG로 희석, 1:400 |
| 플라이 스트레인 | |||
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