초파리 남성 부속샘 박리: 2차 세포를 분리하는 방법

초록

출처: Immarigeon, C., et al. 초파리 남성 부속샘의 2차 세포에서 RNA를 분리하기 위한 FACS 기반 프로토콜. J. Vis. 특급 (2019).

이 비디오는 수컷 파리의 부속샘을 해부하는 방법을 설명하고 고립된 분비샘이 단일 세포 현탁액으로 해리되는 예를 보여줍니다.

프로토콜

이 프로토콜은 Immarigeon et al., A FACS-based Protocol to Isolate RNA from the Secondary Cells of Drosophila Male Accessory Glands, J. Vis. Exp. (2019)에서 발췌

한 것입니다.

1. 솔루션 및 재료 준비

1. 다음 해결 방법을 준비합니다.
   1. SSM(Serum Supplemented Medium) 준비: 슈나이더의 초파리 배지는 10%의 열 불활성화 소 태아 혈청과 1%의 페니실린-스트렙토마이신으로 보완됩니다.
   2. 1x 트립신 효소(예: TrypLE Express Enzyme)의 분취액을 준비하고 실온에서 보관합니다.
   3. 파파인 분취량[50 U/mL]을 준비합니다(-20 °C에서 보관하고 한 번만 해동).
   4. 1x 인산염 완충액 식염수(PBS, 실온에서 보관)를 준비합니다.
2. 액세서리 땀샘의 물리적 해리를 위해 여러 개의 화염 원형 피펫 팁을 준비합니다.
   

재료

이 논문에 사용된 재료 목록

이름	회사	카탈로그 번호	댓글
해부를 위한 쌍안 현미경
GFP용 광원이 있는 쌍안경
분젠
플라스틱 마이크로튜브 1.5 mL	에펜도르프
미세 해부 겸자
소 태아 세럼	지브코	10270-106	사용 전에 열이 비활성화됨
해부용 유리 접시
얼음 양동이
P1000	길슨
P20	길슨
P200	길슨
파파인			50U/mL 재고
PBS (PBS)			집에서 만든
페니실린-스트렙토마이신	지브코	제15070-063
슈나이더의 초파리 배지	지브코	제21720-001
Tipone 1250 μL 눈금 팁	스타랩	S1161-1820
Tipone 200 μL 베벨 팁	스타랩	S1161-1800
TrypLE 익스프레스 효소	지브코	12604013

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