초파리 melanogaster 난소 박리: 생체 외 조직 준비를 위한 기술

초록

출처: Parker, D. J., et al. 초파리 난소의 미토콘드리아 구조 및 기능 연구. J. Vis. 특급 (2017).

이 비디오는 초파리 난소의 일반적인 해부학적 구조를 설명하고 실시간 또는 고정 이미징을 위해 난소를 해부하는 방법을 제공합니다.

프로토콜

이 프로토콜은 Parker et al., Studying Mitochondrial Structure and Function in Drosophila Ovaries, J. Vis. Exp. (2017)에서 발췌

한 것입니다.

1. 초파리의 준비 (필요한 도구는 그림 1A)

1. 설명된 모든 실험의 경우, 초파리를 포획한 후 5일 이내에 수집하여(실온 또는 25°C에서 유지) 5 - 7mL의 초파리 식품으로 채워진 바이알에 넣고 각 바이알에 25마리 이하의 파리가 있는 바이알에 넣습니다. 암컷:수컷 비율을 2:1로 유지합니다.
2. 과립 효모를 소량 뿌려 초파리 난자 생산을 자극합니다. 2 - 4일 이내에 실험적 조작을 수행합니다.

2. 초파리 난소 해부 (필요한 도구는 그림 1A)

1. 곤충 해부 매체(재료 표 참조)를 실온, 25°C로 가열합니다.8웰 유리 해부 접시의 웰 3개를 각 웰에 200μL의 배지로 채웁니다.
2. 블로우 건의 바늘을 바이알 플러그 아래에 놓아 CO₂로 초파리를 마취합니다. 플라이 패드에 놓습니다. 해부 현미경을 사용하여 암컷 5마리를 분류하고 해부 접시의 첫 번째 우물에 넣습니다. 생체 현미경 검사를 수행할 때 한 번에 하나의 초파리를 처리합니다.
3. 해부 현미경의 접안렌즈를 통해 보면서 두 쌍의 집게를 사용하여 복부에서 흉부를 절단합니다. 집게를 사용하여 복부를 접시의 두 번째 우물로 조심스럽게 옮깁니다.
4. 한 쌍의 집게를 사용하여 복부의 뒤쪽 끝을 잡고 다른 한 쌍의 집게로 난소를 천천히 밀어냅니다(다른 복부 내용물과 함께). 이 시도가 실패하면 집게를 앞쪽 끝에 삽입하여 난소를 분리하여 복부 외골격을 조심스럽게 제거합니다.
5. 겸자를 사용하여 불투명한 뒤쪽 끝(즉, 난황으로 채워진 후기 단계의 난자)을 잡고 접시의 세 번째 웰로 조심스럽게 옮겨 생체 현미경 검사를 위해 처리하거나 면역 염색을 수행하기 위해 고정합니다.
한 쌍의 집게로 뒤쪽
6. 끝을 잡고 각 난소의 뒤쪽 끝에서 앞쪽 끝까지 놀리는 바늘을 가볍게 쓸어 난소 주위의 보호 덮개를 조심스럽게 애타게 놀립니다.
   참고: 놀리는 동안 손상을 최소화하려면 바늘 끝을 구부리고 현미경의 배율을 높여 각 난소를 확대합니다(그림 1A). 놀리는 것은 칼집을 부러뜨릴 수 있을 만큼 효과적이어야 하지만, 난소의 온전함을 보존하기 위해 조심스럽게 행해야 합니다.

결과

그림 1: 실험 계획 및 준비. (A) 설명된 방법에 사용된 도구: A. 플라이 바이알; B. 곤충 해부 매체; C. 파라포름알데히드; D. 플라이 브러시; E. 접시 해부; F. 커버 유리; G. 마이크로퓨지 튜브. H. 유리 바닥 접시; I. 유리 슬라이드; J. 1,000-μL 마이크로피펫; K. 200-μL 마이크로피펫; L. 2.5μL 마이크로피펫; M. 팁이 구부러진 놀리는 바늘 (팁이 확대 됨); N. 두꺼운 집게; O. 얇은 집게. (B) 설명된 방법을 나타내는 순서도 개략도. 이 그림의 더 큰 ...

재료

이 논문에 사용된 재료 목록

이름	회사	카탈로그 번호	댓글
그레이스의 매체 (곤충 해부 매체)	피셔 사이언티픽	30611031-2
41 파라포름알데히드 AQ	전자 현미경 과학	50-259-99
폴리라이신	MP 바이오메디컬	ICN15017625
플라이 바이알	피셔 사이언티픽	AS-515
플라이 바이알 플러그	피셔 사이언티픽	AS273
Jazzmix Drosophila food (초파리 식품)	피셔 사이언티픽	AS153
Azer Scientific EverMark Select 현미경 슬라이드	피셔 사이언티픽	Tel.22-026-252
현미경 커버 유리	피셔 사이언티픽	12-542-B
Mat Tek Corp 유리 바닥 Mircrowell 접시	피셔 사이언티픽	P35G-0-14-C
활성 건조 효모	피셔 사이언티픽	ICN10140001
Dumont #5 집게	정밀 과학 기술	11251-20
Moria 니켈 도금 핀 홀더	정밀 과학 기술	26016-12
Minutien 핀	정밀 과학 기술	26002-15
MYFP ( w[*]; P{w[+mC]=sqh-EYFP-Mito}3 )	블루밍턴 스톡 센터	7194
플라이 패드	날아다니는 물건	59-118
블로우건	날아다니는 물건	54-104
블로우건 바늘	플라이스터프	54-119
해부 현미경	칼 자이스	스테미 2000

시리즈 조 년 년 년 년 년 년