Island Assay: 초파리의 운동 거동을 평가하기 위한 고처리량 방법

초록

출처: Eidhof, I., et al. 초파리 섬 분석에서 운동 행동의 고처리량 분석. J. Vis. 특급 (2017).

이 비디오는 초파리의 운동을 연구하는 데 사용되는 행동 방법인 섬 분석에 대해 설명합니다. Sample Protocol은 반자동 이미지 분석과 호환되는 분석 설정을 특징으로 합니다.

프로토콜

이 프로토콜은 Eidhof et al., High-throughput Analysis of Locomotor Behavior in the Drosophila Island Assay, J. Vis. Exp. (2017)에서 발췌

한 것입니다.

1. 섬 분석 상자의 구성

폴리메틸메타
1. 크릴레이트(PMMA)와 같은 견고한 재료로 만든 트레이를 준비하여 물층(즉, 수조)을 담습니다. 재료가 흰색이 아닌지 확인합니다.
   참고: 40 x 35 x 2.5cm³의 치수를 권장합니다(그림 1A).
2. PMMA와 같은 견고하고 투명한 재질로 만든 상자 (42 x 38 x 25cm³)를 준비하여 파리가 실험실 공간으로 탈출하는 것을 방지하기 위해 욕조 주변에 놓습니다. 실험자가 파리가 있는 바이알을 쉽게 다루고 섬에 떨어뜨릴 수 있을 만큼 충분히 큰 구멍(20 x 30cm²)을 측면에 놓습니다(그림 1

결과

그림 1: 섬 분석의 요구 사항, 실험 절차 및 분석을 요약한 순서도. (A) 섬 분석 장비. (B) 섬 분석을 위한 실험 설정. (C) 섬 분석. (D) "Drosophila Island Assay" 매크로를 사용한 섬 분석 데이터 처리. "Drosophila Island Assay" 매크로는 3개의 하위 매크로로 구성됩니다: 1) make stack 및 projection, 2) 플랫폼 정의, 3) 분석. (E) "Island Assay Analysis" 스크립트를 사용한 데이터의 처리 및 통계적 평가.

재료

이 논문에 사용된 재료 목록

이름	회사	카탈로그 번호	댓글
25 x 95mm 초파리 바이알	플라이스터프	재질 보기 32-116SB	-
로지텍 C525 HD 웹캠	로지텍	-	USB 연결이 있는 모든 웹캠이 적합합니다.
웹캠을 잡을 수 있습니다	-	-	-
램프	-	-	12V LED 조명이 적합합니다.
두근 패드	-	-	모든 마우스 패드가 작동합니다.
섬 분석 상자	-	-	크기 : 40x35x2.5cm. 구멍 : 20x30cm. 투명.
섬 분석 목욕	-	-	크기 42x38x25cm. 흰색이 아닙니다.
섬/승강장	-	-	크기 42x38x25cm. 균일 한 흰색.
비누	-	-	표준 식기 세척 세제가 적합합니다.
컴퓨터	-	-	스크립트는 Windows와 Mac 모두에서 실행됩니다.
이미지 레코딩 소프트웨어: HandiAvi®	AZ센던트®	-	HandyAvi는 Windows와만 호환되며 원고 전체에 설명되어 있습니다. http://www.azcendant.com/DownloadHandyAvi.html (버전 5.0)에서 다운로드할 수 있습니다.
이미지 녹화 소프트웨어: WebcamCapture	-	-	이미지 녹음을 위해 HandyAvi 대신 Mac에서 사용할 수 있으며 수 있는 Fiji/ImageJ 플러그인>https://imagej.nih.gov/ij/plugins/webcam-capture/ 이 방법을 사용할 때 사용자는 이 원고에 표시된 것과 동일한 폴더 설정 및 이미지 녹화 설정을 사용해야 합니다. 각 실험적 복제에 대해 캡처된 이미지 스택을 해당 실험적 복제 폴더에 Stack.tiff 으로 내보내야 한다는 점을 제외하고.이 데이터에 대해 "Drosophila Island Assay" 매크로를 실행하면 "First frame identifier" 설정에 텍스트가 없어야 합니다.

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