Two-Photon Laser-Induced Neural Injury: A Method to Observation Axon Degeneration and Regeneration in Drosophila larvae (이광자 레이저 유도 신경 손상: 초파리 유충에서 축삭돌기 퇴행 및 재생을 관찰하는 방법)

초록

출처: Li, D., et al. 말초 및 중추 신경계의 신경 재생을 연구하기 위한 초파리 생체 내 손상 모델. J. Vis. 특급 (2018).

이 비디오는 Drosophila melanogaster 유충에서 축삭의 이광자 레이저 절제와 부상을 유도하고 부상 부위를 이미지화하는 예제 프로토콜에 대해 설명합니다.

프로토콜

이 프로토콜은 Li et al., A Drosophila In Vivo Injury Model for Studying Neuroregeneration in the Peripheral and Central Nervous System, J. Vis. Exp. (2018)에서 발췌

한 것입니다.

1. 이광자 손상 및 공초점 이미징

1. 현미경 설정
   참고: 이 실험에는 이광자 레이저가 있는 컨포칼 레이저 스캐닝 현미경이 사용되었지만, 동일한 설정의 다른 시스템도 충분합니다. 2광자 레이저(930nm)는 부상 전달에 사용되었으며 아르곤 레이저(488nm)는 GFP의 공초점 이미징에 사용되었습니다.
   1. 각 세션을 시작할 때 이광자 레이저 및/또는 컨포칼 레이저와 현미경을 켭니다. 이미징 소프트웨어를 엽니다.
   2. 이광자 손상의 경우 930nm(1,950mW)에서 이광자 레이저로 GFP를 이미징하기 위해 다음 매개변수를 설정합니다.
      1. 회선 스캔 모드를 선택합니다. 핀홀을 끝까지 엽니다. 레이저 강도를 ~20%(390mW)로 높입니다.
      2. 프레임 스캔으로 5....

결과

그림 1: 주변부의 Da 뉴런 축삭 재생은 클래스 특이성을 나타냅니다. (A와 B) 유충의 위치를 보여주는 개략도. (C) 클래스 III da 뉴런의 개략도. (D) 19-12-Gal4, UAS-CD4-tdGFP, repo-Gal80/+로 표지된 III급 da 뉴런 ddaF의 축삭돌기는 재성장하지 못합니다. (E) 클래스 IV da 뉴런의 개략도. (F) ppk-CD4-tdGFP/+로 표지된 class IV da neurons v'ada의 축삭돌기는 병변 부위 너머로 재성장합니다. (D와 F) 빨간색 선은 축삭돌기의 길이를 나타내고, 녹색 점선은 세포체와 축삭 수렴점(DCAC).......

재료

이 논문에 사용된 재료 목록

이름	회사	카탈로그 번호	댓글
디 에틸 에테르, ACS 시약, 무수	아크로스 오가닉스	AC615080010
할로카본 27 오일	제네시 사이언티픽	59-133
프로피온산	J.T.베이커	U33007
커버 안경 : 직사각형	피셔 사이언티픽	12-544-D	50mm X 22mm
Zeiss LSM 880 레이저 스캐닝 현미경	자이스
Zen 소프트웨어	자이스
카멜레온 울트라 II	간섭성의

명 조