Drosophila Nurse Cells의 미세주입: 세포 내 전달 방법

초록

출처: Catrina, I. E., et al. 살아있는 초파리 멜라노가스터 난실에서 내인성 mRNA를 시각화하고 추적합니다. J. Vis. 특급 (2019).

크기가 크고 조직이 비교적 단순하기 때문에 초파리 간호사 세포는 살아있는 세포 이미징 연구에 이상적으로 적합합니다. 이 동영상은 외인성 화합물이 세포로 전달되기 위한 미세주입 방법을 설명하며, 주요 프로토콜은 내인성 mRNA 전사체를 시각화하는 데 사용되는 분자 비콘(MB)이라고 하는 형광 올리고뉴클레오티드 프로브를 사용한 절차를 보여줍니다.

프로토콜

이 프로토콜은 Catrina et al., Visualizing and Tracking Endogenous mRNAs in Live Drosophila melanogaster Egg Chambers, J. Vis. Exp. (2019)에서 발췌했습니다.

1. 라이브 셀 이미징을 위한 MB 설계

1. mfold server의 "RNA form"(http://unafold.rna.albany.edu/?q=mfold/RNA-Folding-Form)을 사용하여 mRNA target의 2차 구조를 예측하기 위해 target RNA sequence를 접습니다.
   1. 대상 염기서열을 FASTA 형식으로 붙여넣기/업로드하고, 5 또는 10% 하위 최적성(각각 MFE 값의 5 또는 10% 이내의 자유 굴곡 에너지를 가진 구조)을 선택하고, 그에 따라 계산된 최대 접기 수를 조정합니다(예: 10% 하위 최적성의 경우 더 큼).
      참고:....

재료

이 논문에 사용된 재료 목록

이름	회사	카탈로그 번호	댓글
분광 형광측정기	플루오로맥스-4 호리바-조빈 이본	해당 없음	광자 계수 분광형광측정기
쿼츠 큐벳	Fireflysci (전 Precision Cells Inc.)	701MFL
Dumont #5 핀셋	세계적인 정밀 기기	501985	얇은 핀셋은 개별 난실을 분리하는 데 매우 중요합니다
할로 카본 오일 700	시그마-알드리치	H8898
커버 슬립 No.1 22 mm×40 mm	폭스바겐	제48393-048
해부 현미경	라이카 MZ6 라이카 마이크로시스템즈 Inc.	해당 없음
CO2 초파리 마취 패드	제네시 과학	59-114
트리스-HCL pH 7.5	시그마-알드리치	1185-53-1
염화마그네슘	시그마-알드리치	7791-18-6
염화나트륨	시그마-알드리치	7647-14-5
스피닝 디스크 컨포칼 현미경	Yokogawa CSU 10 회전 디스크가 장착된 Leica DMI-4000B 도립 현미경 Leica Microsystems Inc.	해당 없음
하마마츠 C9100-13 ImagEM EMCCD 카메라	하마마쓰	해당 없음
PatchMan NP 2 마이크로 매니퓰레이터	에펜도르프 Inc.	920000037
FemtoJet 마이크로인젝터	에펜도르프 Inc.	920010504
주사 바늘: 펨토팁 II	에펜도르프 Inc.	930000043
로딩 팁: 20 μL Microloader	에펜도르프 Inc.	930001007
마이크로 커버 안경 번호 1 또는 1.5, 22mm x 40mm	폭스바겐	48393-026; 48393-172
드라이 이스트	모든 식료품점	해당 없음
컴퓨터, > 20GB RAM			대부분의 컴퓨터에서 처리를 수행할 수 있지만 기능이 높을수록 처리 속도가 빨라집니다

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