화학적 건조: 주사 전자 현미경(SEM)을 위한 생물학적 시료 준비

초록

출처: Koon, M. A., et al. 주사 전자 현미경(SEM)에서 형태학적 분석을 위한 화학적 건조를 사용한 원핵 및 진핵 생물 유기체의 준비. J. Vis. 특급 (2019).

주사 전자 현미경(SEM)은 주로 생물학적 샘플의 표면 특징을 이미지화하는 강력한 도구입니다. 그러나 적절한 시료 전처리는 고품질 이미지를 얻는 데 매우 중요합니다. 이 비디오는 SEM을 위해 온전한 성인 초파리를 준비하는 탈수 및 건조 단계에 중점을 둡니다.

프로토콜

이 프로토콜은 Koon et al., Preparation of Prokaryotic and Eukaryotic Organisms Using Chemical Drying for Morphological Analysis in Scanning Electron Microscopy (SEM), J. Vis. Exp.에서 발췌한 것입니다.(2019).

1. 준비와 고정

1. Drosophila melanogaster (초파리)를 준비합니다.
   1. 100% 이산화탄소를 사용하여 성충 파리를 마취합니다. 마취된 성인(약 10-30마리)을 작은 플라스틱 나사 캡 바이알 또는 1.5mL 원심분리 튜브에 넣습니다.
   2. 마취된 파리를 1mL의 고정제(1.25% 글루타르알데히드, 0.1M 인산염 완충액 pH 7.2)에 4°C에서 2시간(또는 밤새) 동안 담급니다. 파리가 고정액의 표면에 떠 있으면 2.5% 폴리에틸렌 글리콜 tert-옥틸페닐 에테르를 몇 방울 떨어뜨려 고정액의 표면 장력을 약화시켜 조직이 완전히 잠길 수 있도록 합니다. 유리 피펫을 사용하여 고정제를 제거합니다.

2. 세....

재료

이 논문에 사용된 재료 목록

이름	회사	카탈로그 번호	댓글
은 도전성 접착제 503	전자 현미경 과학	12686-15
알루미늄 계량 접시	피셔 사이언티픽	08-732-100
알루미늄 실장 스터브(12mm)	전자 현미경 과학	75210
알루미늄 실장 스터브(25mm)	전자 현미경 과학	75186
접착 탭	전자 현미경 과학	76760
전도성 탄소 접착 탭	전자 현미경 과학	77825
폴리에틸렌 글리콜 tert-옥틸페닐 에테르 (Triton X-100)	폭스바겐	97062-208 (영어)
히타치 3400N-II SEM	히타치	https://www.hitachi-hightech.com/us/product_list/	회사는 더 이상 이 모델을 판매하지 않는 것 같습니다

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