유충 림프선 박리: 초파리 혈구 생산 기관 분리

초록

출처: Reimels, T. A. and Pfleger, C. M. 초파리 유충의 림프선과 혈구를 검사하는 방법. J. Vis. 특급 (2016).

이 동영상은 파리 유충의 주요 조혈 부위인 초파리 림프샘에 대해 설명하고, 면역조직화학 및 형광 이미징을 위해 장기를 해부하고 장착하는 프로토콜의 예시를 보여줍니다.

프로토콜

이 프로토콜은 Reimels와 Pfleger, Methods to Examine the Lymph Gland and Hemocytes in Drosophila Larvae, J. Vis. Exp. (2016)에서 발췌한 것입니다.

1. 유충 림프선 면역조직화학

참고: 림프선은 유충의 앞쪽 끝에서 약 1/3 길이의 등쪽 뇌 약간 아래에 있습니다. (그림 1B.) 림프선은 등쪽 혈관 측면에 있으며 입 고리 또는 뇌에 부착되어 가장 쉽게 해부됩니다. 야생형, 세 번째 instar 림프선은 매우 작은 구조입니다. 1차 엽의 길이는 약 100 - 200 μm입니다. (그림 2A.)

1. 이 분석에서 거의 동일한 발달 단계의 유충을 얻으려면 암컷이 2-6시간의 고정된 시간 동안 알을 낳을 수 있도록 하여 난자 수집을 제한합니다.
2. 림프선 절제
   1. 각 실험 조건에 대해 1ml 1x PBS....

결과

그림 1: In vivo 결정 세포 멜란화. A) 유충은 가열 전에 PCR 튜브에 개별적으로 배치되었습니다. 빨간색 화살표는 튜브 바닥에 있지 않은 유충을 나타냅니다. B) 가열 후 전형적인 결정 세포 멜란화 패턴으로, 때때로 림프샘(화살표, 등쪽은 표시, 앞쪽은 왼쪽)을 드러냅니다. 스케일 바는 1mm를 나타냅니다. 이 그림의 더 큰 버전을 보려면 여기를 클릭하십시오.

재료

이 논문에 사용된 재료 목록

이름	회사	카탈로그 번호	댓글
PBS 정제	MP 바이오메디컬	2810305
해부 접시	코 닝	7220-85
마이크로 원심분리기 튜브	덴빌	C2170
실리콘 해부 패드, Sylgard 184 키트로 제작	Krayden (Fisher를 통해 배포)	NC9644388(Fisher 카탈로그 번호)	제조사 지침에 따라 Sylgard 엘라스토머 키트의 구성 요소를 혼합하여 페트리 접시에서 만들어졌습니다.
실체현미경	Morrell Instruments (니콘 대리점)	MNA42000, MMA36300	니콘 모델 SMZ1000 및 SMZ645
티슈 와이프	폭스바겐	82003-820년
집게	전자 현미경 과학	72700-DZ
P200 피펫	에펜도르프	3120000054
포름알데히드	어부	BP531-500
트리톤	어부	BP151-500
트윈 20	어부	BP337-500
소 혈청 알부민	로키 마운틴 바이오제제	BSA-BSH-01케이
노멀 염소 세럼	시그마	G9023-10ML
노멀 당나귀 세럼	시그마	D9663-10ML
200 프루프 에탄올	폭스바겐	V1001
N-프로필 갈레이트	MP 바이오메디컬	102747
글리세롤	폭스바겐	엠-4750
다피(4',6-디아미디노-2-페닐린돌)	어부	62248
현미경 커버 유리, 18mm 원형	어부	전화 12-545-100
유리 현미경 슬라이드	어부	Tel.: 22-034-980
24웰 플레이트	코 닝	351147
일회용 이송 피펫	어부	오전 13-711-9시
형광 현미경	자이스		악시오 이미저.Z1

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