방법 논문

Chorion and Vitelline membrane mechanical removal: 직접 관찰을 위해 초파리 난모세포를 준비하는 방법

2023년 4월 30일

이 논문에서

초록

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

출처: Perkins, A. T., Bickel, S. E. FISH(Fluorescence In Situ Hybridization)를 사용하여 전중기 및 중기 I 초파리 난모세포의 팔 응집력 상태를 모니터링합니다. J. Vis. 특급 (2017).

이 비디오는 이전에 고정된 성숙한 초파리 난모세포에서 융모막과 유리막을 기계적으로 제거하는 방법을 설명합니다. 주요 프로토콜은 형광 in situ hybridization assay와 호환되는 난모세포를 생성하는 절차에 대한 자세한 시연을 보여줍니다.

프로토콜

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

이 프로토콜은 Perkins and Bickel, Using Fluorescence In Situ Hybridization (FISH) to Monitor the State of Arm Cohesion in Prometaphase and metaphase I Drosophila Oocytes, J. Vis. Exp. (2017)에서 발췌한 것입니다.

1. 코리온(Chorions) 및 비텔린막(Vitelline membranes) 제거

참고: 필요한 도구는 그림 1을 참조하십시오.

  1. 말기 난모세포 분리
    1. 얕은 해부 접시에 PBSBTx 1mL를 추가합니다. BSA 코팅된 팁이 있는 P200을 사용하여 고정 난소(~150μL)를 얕은 접시로 옮깁니다. 피펫은 BSA 코팅된 피펫 팁으로 난소를 위아래로 움직여 덜 성숙한 난모세포에서 성숙한 난모세포를 제거합니다.
    2. 후기 단계의 난모세포가 충분히 분리되면 모든 조직을 500μL 마이크로분리 튜브로 옮깁니다. 파스퇴....

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결과

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

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그림 1: 세포학 도구. 프로토콜에 사용되는 도구: (1) 한 쌍의 집게(#5 Dumont); (2) 텅스텐 바늘; (3) 덮개가 있는 깊은 우물 접시; (4) 얕은 유리 해부 접시; (5) 파스퇴르 피펫을 뽑았습니다. 이 그림의 더 큰 버전을 보려면 여기를 클릭하십시오.

figure-results-2
그림 2: 롤링 난모세포를 위한 슬라이드의 배열 및 이동. (A) 프로.......

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재료

이 논문에 사용된 재료 목록
이름회사카탈로그 번호댓글
소 혈청 알부민(BSA)피셔 사이언티픽BP1600-10010% 재고 준비
동결 부분 표본
트리톤 X-100 10%써모 사이언티픽(Thermo Scientific28314Surfact-Amps
PBSBTx1X PBS, 0.5% BSA, 0.1% 트리션 X-100
집게뒤몽#5 이녹스, 바이오로지
9 "일회용 유리 파스퇴르 피펫어부13-678-20씨살균을 위한 오토클레이브
얕은 유리 해부 접시맞춤 제작
깊은 우물 접시 (3 우물)파이렉스7223-34
텅스텐 바늘만든
반투명 유리 슬라이드, 25 x 75mmVWR 사이언티픽제48312-002
15 mL 코니컬 튜브다양한
500 μl 마이크로분리관다양한
킴와이프다양한일회용 물티슈
) 년 호

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태그

PBSBTx

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