C. 예쁜꼬마선충 생식선 압출: 빠른 해부 기술

초록

출처: Gervaise, A. L. and Arur, S. C. elegans 생식세포에서 활성 ERK의 공간 및 시간 분석. J. Vis. 특급 (2016).

이 비디오는 성체 예쁜꼬마선충의 생식선을 해부하여 면역 염색 및 형광 이미징에 적합한 조직을 만드는 방법을 설명합니다.

프로토콜

이 프로토콜은 Gervaise and Arur, C. elegans 생식선에서 활성 ERK의 공간 및 시간 분석. J. Vis. 특급.(2016).

1. 생식선을 얻기 위한 성충 해부

1. 1.5 mL 마이크로 원심분리 튜브에서 100 μL의 M9 버퍼에서 원하는 특정 발달 단계(L1, L2, L3, L4, 성인 등)에서 100 - 150 WT(N2) 또는 원하는 유전자형을 선택합니다.
2. 마이크로 원심분리기 튜브에 900μL의 M9 버퍼를 채웁니다(재료 표 참조). 마이크로 원심분리기에서 1,000 x g의 튜브를 주변 온도에서 1분 동안 원심분리합니다.
3. M9 버퍼의 900μL를 부드럽게 제거하고 버립니다. 해부 현미경으로 완충액을 제거하여 벌레가 실수로 제거되지 않도록 합니다.
4. 매번 새로운 M9 버퍼를 사용하여 1.2 - 1.3단계를 두 번 더 반복합니다. 이렇....

재료

이 논문에 사용된 재료 목록

이름	회사	카탈로그 번호	댓글
평평한 바닥 유리 시계 접시	한천 사이언티픽	AGL4161	우리는 절개된 생식선이 플라스틱에 달라붙는 경우가 많기 때문에 유리를 사용합니다
바늘 25g	BD 프리시전글라이드	305122
주사기(1mL 또는 5mL일 수 있음)	BD 주사기	1mL: BD 309659
현미경 슬라이드(25 x 75 x 1.0mm)	피셔브랜드	전화 12-550-343
임상 벤치 탑 원심 분리기
*M9 솔루션
레바미솔	시그마	L9756
*M9 버퍼 레시피			3 g KH2PO4, 6 g Na2HPO4, 5 g NaCl, 1 mL 1 M MgSO4, H2O to 1 L.