에탄올 고정 및 DAPI 염색: 예쁜꼬마선충에서 DNA를 시각화하는 방법

초록

출처: Clarke, E. K., et al. Manipulation of Ploidy in Caenorhabditis elegans. J. Vis. 특급 (2018).

여기에서는 고정되고 손상되지 않은 선충에서 게놈 DNA를 시각화하는 데 사용되는 기술에 대해 설명합니다. 이 비디오에는 수정되지 않은 예쁜꼬마선충 난모세포에서 염색질을 계수하는 프로토콜의 예가 포함되어 있습니다.

프로토콜

이 프로토콜은 Clarke et al, Manipulation of Ploidy in Caenorhabditis elegans, J. Vis. Exp. (2018).

사배체 균주는 수정되지 않은 난모세포의 염색체 수를 세어 검증할 수 있습니다. 형광 현미경 검사는 균주에 염색체에 대한 형광 마커가 있는 경우 수정되지 않은 이배체 난모세포(감수분열 이전)의 염색체 쌍 수를 스크리닝하는 데 사용할 수 있습니다. 형광 염색체 마커가 없는 경우, 사배체 선충은 선충을 고정하고 DNA 염료로 염색하여 스크리닝할 수 있습니다. 에탄올 고정 및 전체 동물 4',6-Diamidine-2'-phenylindole dihydrochloride(DAPI) 염색에 대한 프로토콜은 아래를 참조하십시오.

전체 동물 DAPI 염색

참고: 12개의 연결된 염색체 쌍을 가진 사배체 균주는 ....

재료

이 논문에 사용된 재료 목록

이름	회사	카탈로그 번호	댓글
해부 현미경	Motic 현미경 검사	SMZ171
이름	회사	카탈로그 번호	코멘트
얼룩
Hoechst 33258, 펜타하이드레이트	비오티움	40045
DAPI	비오티움	40011
이름	회사	카탈로그 번호	코멘트
에탄올 고정
에탄올, 순수, 190프루프(95%), USP	콥텍, VWR	89125-166
이름	회사	카탈로그 번호	코멘트
M9 버퍼
염화나트륨, 생명공학 등급	폭스바겐	97061-278
인산칼륨, 일염기성 무수 등급	폭스바겐	97062-346
인산 나트륨, 일 염기성 이수화 물	피셔 사이언티픽	AC271750025