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Four-Way Olfactometer Assay: 초파리에서 냄새 유발 반응을 평가하는 방법

April 30th, 2023

In This Article

Abstract

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$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

출처: Lin, C.C., et al. Olfactory Behaviors Assayed by Computer Tracking Of Drosophila in a Four-quadrant Olfactometer(4사분면 후각계에서 초파리의 컴퓨터 추적에 의한 후각 행동). J. Vis. 특급 (2016).

초파리는 복잡한 후각 시스템을 가지고 있으며, 수백 가지 냄새 물질을 구별할 수 있으며, 후각을 사용하여 행동 결정을 지시할 수 있습니다. 이 비디오는 파리의 후각 행동 반응을 연구하는 방법인 4방향 후각계 분석에 대해 설명합니다. 주요 프로토콜 클립은 테스트 파리를 처리하는 방법과 분석을 수행하는 동안 중요한 단계가 무엇인지 보여줍니다.

Protocol

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이 프로토콜은 Lin et al., Olfactory Behaviors Assayed by Computer Tracking Of Drosophila in a Four-quadrant Olfactometer, J. Vis. Exp. (2016)에서 발췌

한 것입니다.

1. 매력적이고 혐오스러운 냄새 물질에 대한 행동 반응

  1. 온도 조절기를 켜고 25°C로 설정합니다.
  2. 튜브를 부취제 챔버의 배출구와 거동 상자의 Push-to-connect 피팅에 삽입하여 부취 챔버(제어 및 테스트 부취 물질)를 연결합니다.
  3. 기류 측정기를 사용하여 각 사분면의 유속을 확인하여 제어 및 냄새 공기 흐름이 100ml/min과 같은지 확인하십시오.
  4. PTFE 플라이 아레나와 유리판을 70% 에탄올로 2-3회 청소하고 완전히 자연 건조(~3-4분)합니다.
  5. 클램프로 유리판을 경기장에 부착합니다.
  6. CO2 마취 없이 유리판 중 하나의 구멍을 통해 경기장으로 날아갑니다. 전송 후 파리가 탈출하지 못하도록 구멍에 원형 메쉬를 놓습니다.
    참고: CO<....

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Results

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그림 1: 4-field Olfactory Assay를 사용하여 생성된 예시 데이터. (A) 4개 필드 경기장의 개략도. (B) 4개의 사분면 모두에 건조한 공기 관류만 포함될 때 중립 반응이 관찰됩니다. (C) 왼쪽 상부 사분면에서 관류된 6.25% 희석된 사과 사이다 식초에 대한 인력 반응. (D) 10% 에틸 프로피오네이트에 의해 유발되는 반발 행동. 그림 2B-2D에서는 수집된 데이터의 단일 궤적이 표시됩니다. 색상 그라데이션은 녹음의 시간 경과를 나타내는 데 사용되며 파란색과 빨간색은 각각 녹음의 시작과 끝입니다. (E) 매력 지수(AI)와 백분율 지수(PI)의 비교. (F

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Materials

List of materials used in this article
NameCompanyCatalog NumberComments
공기 전달 시스템(필요한 수량)
튜빙 및 커넥터
열가소성 NPT(F) 매니폴드Cole-Parmer, 일리노이주, 미국R-31522-311
육각저감니플(1/4MNPT->1/8MNPT)McMaster-Carr, 일리노이주, 미국5232T3141
튜빙 (ID:1/8)McMaster-Carr, 일리노이주, 미국5108K4350 피트
튜빙 (ID:1/16)McMaster-Carr, 일리노이주, 미국52355K41100 피트
가시가 있는 관 이음쇠McMaster-Carr, 일리노이주, 미국5117K711 팩
푸쉬-투-커넥트(Push-to-connect) 튜브 피팅McMaster-Carr, 일리노이주, 미국5779K1024
가시 튜브 피팅 (1/4MNPT->1/8BF)McMaster-Carr, 일리노이주, 미국5463K4391 팩 (10)
가시 튜브 피팅 (1 / 8MNPT-> 1 / 8BF)McMaster-Carr, 일리노이주, 미국5463K4382 팩 (10)
가시 튜브 피팅 (1 / 8MNPT-> 1 / 16BF)McMaster-Carr, 일리노이주, 미국5463K42 팩 (10)
가시 관 이음쇠 (1/4MNPT->1/4BF)McMaster-Carr, 일리노이주, 미국5670K841
육각 머리 플러그McMaster-Carr, 일리노이주, 미국제48335K1521
공기 압력 조절기, 공기 필터 및 유량계(필요한 수량)
Labatory 가스 건조 장치W A HAMMOND DRIERITE CO LTD, 오하이오, 미국모델: L68-NP-303; 재고 #268401
150mm 플로우튜브용 멀티튜브 프레임Cole-Parmer, 일리노이주, 미국R03215-301
150mm 플로우튜브용 멀티튜브 프레임Cole-Parmer, 일리노이주, 미국R03215-761
150mm 플로우튜브Cole-Parmer, 일리노이주, 미국R-03217-159
밸브 카트리지Cole-Parmer, 일리노이주, 미국R-03218-729
정밀 공기 조절기McMaster-Carr, 일리노이주, 미국6162K131
Soleniod 밸브오토메이트 사이언티픽, 버클리, 캘리포니아02-10나는4
솔레노이드 밸브 컨트롤러ValveLink 8.2, Automate Scientific, 버클리, 캘리포니아1월 18일1
전자식 유량계니 웰AWM3100V1
DAQ (NI USB-6009, National Instruments) 및내쇼날인스트루먼트NI USB-60091
전원 공급 장치Extech 기기3822001
냄새 챔버
폴리 프로필렌 와이드 마우스 항아리 2 온스; 60 ml날진562118-0002실험당 최소 5개가 필요하지만 각 냄새 물질의 각 희석에 대해 별도의 챔버가 필요합니다. 컨테이너 스토어에서 사용 가능, 파트 #635114)
유리 냄새 챔버, 0.25 oz햇살 병LB4B실험당 최소 5개가 필요합니다.
냄새 챔버용 "In" 밸브Smart Products, Inc., 캘리포니아, 미국214224PB-0011S000-4074이 부품 중 1개는 냄새 챔버당 사용되지만 자주 교체해야
냄새 챔버용 "Out" 밸브Smart Products, Inc., 캘리포니아, 미국224214PB-0011S000-4074이 부품 중 1개는 냄새 챔버당 사용되지만 자주 교체해야
O 링RT Dygert International, 미네소타, 미국AS568-029 부나-N O-R1 팩 (100)
플라이 아레나, 카메라 및 행동 상자(필요한 수량)
동작 및 카메라 상자 재질Interstate plastics, 캘리포니아, 미국ABS 블랙 압출 (https://www.interstateplastics.com/Abs-Black-Extruded-Sheet-ABSBE~~ST.php)1803 평방 인치
플라이 아레나 및 냄새 챔버 인서트용 테프론, 3/8" 두께, 12" x 12"McMaster-Carr, 일리노이주, 미국8545K271
유리판, 1/8" 두께, 9" x 9"McMaster-Carr, 일리노이주, 미국8476K1912
듀얼 액션 열전 컨트롤러WAtronix Inc, 캘리포니아, 미국DA12V-K-01
IR LED 어레이Advanced Illumination, 미국 버몬트주 로체스터AL4554-88024, PS24-TLLED 어레이 2개 및 전원 공급 장치 1개
에어컨 유닛Melcor 스토어MAA280T-121
이미징 시스템(필요한 수량)
Cosmicar/Pentax C21211TH(12.5mm F/1.4) C-마운트 렌즈B AND H PHOTO AND ELECTRONICS CORP, 뉴욕, 미국PEC21211 KP1
CCXC-12P05N 상호 연결 케이블B AND H PHOTO AND ELECTRONICS CORP, 뉴욕, 미국SOCCXC12P05N1
DC-700 카메라 어댑터B AND H PHOTO AND ELECTRONICS CORP, 뉴욕, 미국SODC7001
B+W 40,5 093 IR 필터B AND H PHOTO AND ELECTRONICS CORP, 뉴욕, 미국우편번호 65-0724421
TiFFEN 40.5mm 원형 편광판아마존1
IR 비디오 카메라Industrial Vision Source, 미국 플로리다주소니 XC-EI50 (SY-XC-E150)1
USB 비디오 컨버터The Imagingsource, 노스캐롤라이나, 미국DFG/USB2-잇1
iFlySpy2 (플라이 추적 소프트웨어)줄리안 브라운, 캘리포니아 스탠포드: julianrbrown@gmail.com아이플라이스파이21
IC 캡처 소프트웨어The Imagingsource, 노스캐롤라이나, 미국(http://www.theimagingsource.com/)
잡다한(필요한 수량)
Dremel 로터리 공구Dremel, 라신, 위스콘신, 미국드레멜 8000-031
유리 절단을 위한 다이아몬드 코팅 드릴 비트다양한 공급업체에서 사용할 수 있습니다. MSC Industrial Supply Co, 멜빌, 뉴욕906063281
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