국소 열 프로브 분석: 초파리 유충의 고온 통각을 평가하는 방법

초록

출처: Chattopadhyay, A., et al. 초파리 유충의 열 통각을 평가하는 지역 및 글로벌 방법. J. Vis. 특급 (2012).

초파리 유충은 잠재적으로 해로운 열 자극에 대한 반응이 동물의 혐오적 또는 소위 "통각" 행동을 유발하는 전용 감각 뉴런(통각 수용기)을 가지고 있습니다. 이 비디오는 열 프로브를 큐티클에 국부적으로 적용한 것에 대한 반응으로 유충 행동을 기록하여 열 통각을 평가하는 방법을 설명합니다. 따라서 이 방법을 국소 열 프로브 분석이라고 합니다.

프로토콜

이 프로토콜은 Chattopadhyay et al., Local and Global Methods of Assessing Thermal Nociception in Drosophila Larvae, J. Vis. Exp. (2012)에서 발췌

한 것입니다.

1. 국부 열 프로브 분석

우리는 Pro-Dev Engineering에서 제조한 맞춤형 열 프로브를 사용하여 개별 유충 신체 세그먼트에 유해한 열 자극을 전달합니다(재료 표 참조). 이 프로브는 최적의 설계 기능(~ .07mm^{, 2} 면적의 작은 금속 팁과 23°C에서 65°C까지 설정 온도를 정확하게 유지할 수 있는 기능)을 가지고 있지만 원칙적으로 최대 20초 동안 정의된 온도로 가열할 수 있는 작은 팁이 있는 모든 도구로 충분합니다. 프로브 팁은 복부 분절 A4의 등쪽 정중선에서 초기 3번째 인스타 유충을 정확하게 자극하는 데 사용됩니다(그림 1 참조). 이 열 자극에 대한 반응으로 유충은 일반적으로 측면으로 360도 이상 구르는 혐오스러운 철수 행동을 보입니다. 이 행동은 일반적으로 운동 활동의 짧은 중....

결과

그림 1: 국소 열 프로브 분석을 위한 실험 설정. 열 프로브는 프로브의 온도를 설정하고 유지하는 데 사용되는 열 제어 장치에 의해 제어됩니다. 프로브는 전후 축에 수직으로 유지되며 수평으로 45° 각도로 유충을 자극하는 데 사용됩니다. 프로브 접촉은 그림과 같이 복부 분절 A4에서 특이적으로 이루어집니다. 사용자는 20초 컷오프까지 또는 롤링 동작이 시작될 때까지 부드러운 압력으로 이 접촉을 유지해야 합니다. 온도가 유해한 것으로 인식되면 유충은 적어도 한 번의 360° 굴림을 특징으로 하는 혐오스러운 금단 행동을 보일 것입니다. 롤의 수는 단일 또는 다수일 수 있습니다(그림 2B 참조).

재료

이 논문에 사용된 재료 목록

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