초파리 Egg-Laying Preference Assay: A Method to Test Decision-Making in Flys(알낳기 선호도 분석: 파리의 의사 결정을 테스트하는 방법)

초록

출처: Gou, B., et al. 개별 Drosophila melanogaster의 알을 낳는 선호도를 조사하기 위한 고처리량 분석. J. Vis. 특급 (2016).

초파리 암컷은 기질 중에서 선택하고 알을 낳기에 매력적인 위치를 선택합니다. 이 비디오는 알을 낳는 선호 분석이라고 하는 의사 결정을 테스트하는 행동 분석에 대해 설명합니다. 특집 클립은 연구원들이 동시에 많은 암컷의 행동을 테스트할 수 있을 뿐만 아니라 비디오 녹화 및 광유전학 설정과도 호환될 수 있도록 하는 맞춤형 설정을 사용한 절차를 보여줍니다.

프로토콜

이 프로토콜은 Gou et al., High Throughput Assay to Examine Egg-Laying Preferences of Individual Drosophila melanogaster, J. Vis. Exp. (2016)에서 발췌한 것입니다.

1. 챔버 구성, 어셈블리, 분석 설정

1. 기계 공장에서 아크릴 알을 낳는 챔버를 만들게 합니다(그림 1AD). 서로 다른 조각의 엔지니어링 도면은 보충 그림 1-3에 나와 있습니다. 고해상도 사진도 여기에서 찾을 수 있습니다(http://www.rebeccayang.org/pdf/chamber%20design.pdf).
2. 그림 1C. 이것은 파리를 개별 알을 낳는 경기장에 싣는 동안 바닥 표면 역할을 합니다.
3. CO₂ 패드에서 암컷을 마취하고 각 알을 낳는 경기장에 개별적으로 로드합니다. 파리가 CO₂에서 회복하고 새로운 환경에 적응할 때까지 ~30분 동안 기다립니다.
4. 아가로스 기질을 준비합니다.
   1. 편의를 위해 미리 만들어진 녹은 1% 아가로스 병을 55°C 수조에 보관하십시오.
   2. 50ml 원뿔형 튜브에 원하는 양의 자당 용액(2M)을 넣고 적절한 양의 아가로스와 혼합합니다. 예를 들어, 150mM 자당 기질을 준비하려면 750μl의 2M 자당 용액을 튜브에 넣은 다음 튜브에 아가로스를 10ml 표시까지 채웁니다.
   3. 같은 방법으로 일반 기질을 준비하되 자당 용액 대신 증류수를 추가합니다.
      참고: 이 프로토콜에서 아가로스의 최종 농도는 1%보다 약간 낮습니다. 우리의 경험에 비추어 볼 때, 아가로스의 정확한 농도는 ~0.9 - 1.1% 이내로 제어되고 두 기질이 동일한 아가로스 농도인 한 중요하지 않습니다.
5. 챔버의 기판(바닥) 조각을 취하고 그림 1 D에서 볼 수 있듯이 각 골에 1,000μl의 아가로스 기판을 피펫팅합니다.
6. 아가로스가 ~30분 동안 굳어지도록 합니다.
7. 아가로스 기질과 파리가 준비되면 알을 낳는 챔버의 세 조각을 모두 조립한 다음 플라스틱 시트를 꺼냅니다.
8. 챔버를 플라이 인큐베이터에 놓습니다.
   참고: 알을 낳는 실험의 길이는 실험의 필요에 따라 달라질 수 있습니다. 일반적으로 O/N(14 - 16시간) 실험을 실행합니다. 또한, 알을 낳는 선호도에 대한 일주기 시기의 유의미한 영향은 관찰되지 않았다.
9. 챔버에 CO₂를 주입하여 암컷을 마취합니다. 챔버를 분해하고 마취된 파리를 파리 시체 안치소(즉, 옥수수 기름으로 채워진 빈 커피 캔)에 버립니다. 기록 보관을 위해 결과를 사진으로 찍습니다(그림 2 참조).
10. 달걀 수를 수동으로 세고 분석을 위한 선호도 지수를 계산합니다. 선호도 지수를 (N_a - N_b)/(N_a + N_b)로 계산하며, 여기서_{N a} 및_{N b}는 각각 사이트 a 대 사이트 b에 있는 난자의 수를 나타냅니다.

결과

그림 1: 알을 낳는 방과 알을 낳는 프로토콜. (A) 완전히 조립된 난자 산란실. (B) 분해된 조각. A: 로딩 조각(상단), B: 분배기 조각(중간), C: 기판(하단) 조각. 이 조각의 엔지니어링 도면은 보충 그림 1-3에 나와 있습니다. (C) 챔버의 적재 부분. A': 슬라이딩 도어, A": 레일. 플라스틱 시트는 적재 된 파리를 제자리에 고정하기위한 바닥 역할을하기 위해 적재 조각에 삽입됩니다. 우리는 일반적으로 플라스틱 시트의 가장자리에 컬러 테이프를 붙입니다(빨간색 화살표). (D) 챔버의 기판(하단) 및 분배기(중앙) 조각. 아가로스는 알을 낳는 기질(화살표) 역할을 하기 위해 개별 홈통에...

재료

이 논문에 사용된 재료 목록

이름	회사	카탈로그 번호	댓글
울트라퓨어 아가로스	인비트로젠	16500-500
자당	시그마	S0389
수조	어부	15-462-6큐
알을 낳는 방	맞춤형 제작
플라이 바이알(좁음)	제네시	기원전 32-116