Egg Laying Assay: 예쁜꼬마선충의 알을 낳는 행동을 정량화하는 방법

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Abstract

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

C. elegans의 알을 낳는 행동은 발달, 생식 및 해부학 연구에서 중요한 정보를 제공할 수 있습니다.이 비디오는 알을 낳는 분석의 중요한 단계를 소개하고 약물의 생식 독성을 테스트하는 샘플 실험을 보여줍니다.

Protocol

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

1. C. elegans 난자 산란 분석

DMSO 또는 에토포사이드를 함유한 NGM 플레이트에서 20°C에서 성년이 될 때까지 64시간(첫 출산 전) 동안 연령 동기화된 난자를 부화합니다.
참고: 성장 측정 실험에서 벌레를 사용하는 것은 선택 사항입니다. 성장 측정과 난자 산란 분석을 함께 수행하는 것이 편리합니다.
5마리의 성충을 화학 물질이 없는 새로운 NGM 플레이트(조건 1, 알에서 성체 단계까지 일정 기간 내에 화학적 처리) 또는 동일한 화학적 전처리(조건 2, 전체 실험 기간 동안 화학 물질의 지속적인 노출)를 포함하는 새 NGM 플레이트로 옮긴 다음 24시간 동안 배양합니다.
참고: 각 처리에 대해 3-5개의 NGM 플레이트를 사용하여 복제하는 것이 좋습니다. 이러한 반복실험은 통계 분석에 사용할 수 있습니다.
위에서 설명한 대로 새 NGM 플레이트로 옮기고 매일 난자 수를 세십시오. 기어 나와 죽고 내부에서 부화한 벌레를 세십시오.
벌레가 보통 5일 안에 더 이상 알을 낳지 않을 때까지 이 단계를 반복합니다.
각 접시에서 벌레 한 마리당 낳은 알의 수를 계산하고 5일 동안 매일 이 값을 합산하여 낳은 알의 총 수를 결정합니다.
참고: 기어 나와 내부적으로 부화한 웜의 수를 계산에서 제외합니다.

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Materials

List of materials used in this article

Name

Company

Catalog Number

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Caenorhabditis elegans N2

Caenorhabditis Genetics Center (CGC)

와일드 타입

디메틸 설폭 사이드

Sigma, 미국

D2650

대장균 OP50

Caenorhabditis Genetics Center (CGC) (Caenorhabditis Genetics Center, 카에노르하브디티스 유전학 센터)

에토 포 사이드

Sigma, 미국

1383회

35 × 10mm 페트리 접시

SPL Life Sciences, 대한민국

10035

실체 현미경

Nikon, 일본

SMZ800N

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