Egg Laying Assay: 예쁜꼬마선충의 알을 낳는 행동을 정량화하는 방법

Lee and Kang, 예쁜꼬마선충의 성장과 번식에 대한 화학물질의 영향 측정, J. Vis. Exp. (2017).

1. C. elegans 난자 산란 분석

1. DMSO 또는 에토포사이드를 함유한 NGM 플레이트에서 20°C에서 성년이 될 때까지 64시간(첫 출산 전) 동안 연령 동기화된 난자를 부화합니다.
   참고: 성장 측정 실험에서 벌레를 사용하는 것은 선택 사항입니다. 성장 측정과 난자 산란 분석을 함께 수행하는 것이 편리합니다.
2. 5마리의 성충을 화학 물질이 없는 새로운 NGM 플레이트(조건 1, 알에서 성체 단계까지 일정 기간 내에 화학적 처리) 또는 동일한 화학적 전처리(조건 2, 전체 실험 기간 동안 화학 물질의 지속적인 노출)를 포함하는 새 NGM 플레이트로 옮긴 다음 24시간 동안 배양합니다.
   참고: 각 처리에 대해 3-5개의 NGM 플레이트를 사용하여 복제하는 것이 좋습니다. 이러한 반복실험은 통계 분석에 사용할 수 있습니다.
3. 위에서 설명한 대로 새 NGM 플레이트로 옮기고 매일 난자 수를 세십시오. 기어 나와 죽고 내부에서 부화한 벌레를 세십시오.
4. 벌레가 보통 5일 안에 더 이상 알을 낳지 않을 때까지 이 단계를 반복합니다.
5. 각 접시에서 벌레 한 마리당 낳은 알의 수를 계산하고 5일 동안 매일 이 값을 합산하여 낳은 알의 총 수를 결정합니다.
   참고: 기어 나와 내부적으로 부화한 웜의 수를 계산에서 제외합니다.