라이트-다크 선호도 테스트: 제브라피쉬의 불안 관련 행동을 연구하는 방법

초록

출처: Holcombe, A., et al. 다중 제브라피시(Danio rerio)에 대한 새로운 약물 투여 방법 및 금단 현상의 정량화. J. Vis. 특급(2014년)

이 비디오는 에탄올에 노출된 후 제브라피시의 불안 관련 행동을 연구하기 위한 명암 선호도 분석을 설명합니다.

프로토콜

1. 행동 테스트

1. 너비 9.5cm, 길이 55cm, 깊이 9.5cm의 흰색 방수 바닥이 있는 밝은/어두운 경기장을 확보합니다(그림 1B). 벨크로를 사용하여 경기장 내부 벽에 흰색과 검은색 방수 무반사 종이를 부착하고 경기장의 절반은 흰색으로, 절반은 검은색으로 덮습니다. 25-28 ° C의 온도에서 서식지 물로 경기장을 5cm 깊이까지 채우십시오. 테스트 내도 이 온도를 유지하십시오.
2. 경기장이 위치할 수 있는 흰색 3면 인클로저를 구성하여 외부 시각적 자극을 최소화합니다. 테스트 영역에 수면에 반사를 일으키지 않는 확산 오버헤드 조명이 있지만 움직임 추적 소프트웨어 또는 비디오 이미지에서 사후 수동 정량화를 할 수 있을 만큼 충분히 밝은지 확인하십시오.
3. 인클로저에 경기장을 배치하고 행동 추적 소프트웨어의 기록 및 움직임 분석 매개변수를 설정합니다. 연구 질문에 따라 시험 기간을 5-15분으로 설정합니다.
   참고: 여기서는 5분을 사용했습니다.
4. 실험할 물고기 무리를 서식지 수조의 연구 구역으로 운반하고 경기장 울타리 밖으로 나갑니다. 10분 동안 물고기를 적응시킵니다.
5. 적절한 그룹의 물고기를 부드럽게 그물로 잡고 라이트/다크 아레나 중앙에 놓고, 물고기가 라이트 존 또는 다크 존으로 편향되는 것을 방지하기 위해 아레나의 긴 축과 평행하게 위치할 때 물고기를 놓아야 합니다.
6. 동물이 풀려난 직후 행동을 기록하기 시작하십시오. 물고기를 추적하거나 물고기가 점프하거나 얼어붙는 데 소프트웨어 문제가 있는지 확인하십시오. 피험자의 절반을 테스트한 후 투기장을 180° 회전시켜 투기장의 끝이 울챤 울짱의 열린 끝을 향
하고 있는 편향으로 인한 혼란을 방지한다.
7. 시험이 끝나면 경기장에서 물고기를 부드럽게 그물로 잡아 저장 탱크 또는 서식지 탱크로 옮깁니다.

2. 분석

1. 밝은 영역과 어두운 영역에서 보낸 시간을 조사합니다. 각 그룹 및 각 물고기에 대해 밝은 영역과 어두운 영역에서 보낸 상대적 시간을 구하고 단일 표본 t-검정(또는 비모수 데이터에 대한 Wilcoxon 부호 순위 검정, 총 시도 시간의 절반 150초와의 차이)을 사용하여 그룹이 한 영역을 다른 영역보다 유의하게 선호하는지 확인합니다.
2. 선호도를 비교하려면 밝은 영역에서 보낸 시간에서 어두운 영역에서 보낸 시간을 빼서 선호도 지수를 계산하고 그룹 간의 차이를 비교합니다. T-검정을 사용하여 두 그룹을 비교할 수 있습니다. 필요한 경우 Tukey의 HSD 사후 검정을 활용한 일원 분산 분석으로 여러 그룹을 비교합니다(또는 비모수 데이터에 대한 Dunn의 사후 비교 검정을 사용한 Kruskal-Wallis 검정).
3. 그룹 간의 속도, 구역 전환 수, 구불구불한 구간 및 부동성을 비교합니다. 필요한 경우 Tukey의 HSD 사후 검정을 활용한 일원 분산 분석을 사용합니다(또는 비모수 데이터에 대한 Dunn의 다중 비교 사후 검정을 사용한 Kruskal-Wallis 검정).

결과

그림 1: 전송 절차 및 라이트/다크 아레나. 이 사진은 이송 절차를 보여줍니다. (A) 먼저 물고기가 이송 탱크(왼쪽)에 있습니다. 에탄올이 들어있는 투여 탱크는 그림입니다 (오른쪽). (BC) 물고기를 이송 탱크에서 에탄올 용액으로 이동하려면 연구원이 산란 인서트를 이송 탱크에서 들어 올려 에탄올 용액 탱크로 들어올려야합니다. (D) 그림과 같이 밝은/어두운 경기장은 너비 9.5cm, 깊이 9.5cm, 길이 55cm입니다. 흰색 바닥을 사용하고 경기장의 절반(왼쪽)에는 검은색 벽을, 다른 절반에는 흰색 벽을 사용하여 밝은 영역과 어두운 영역을 만듭니다.

재료

이 논문에 사용된 재료 목록

이름	회사	카탈로그 번호	댓글
라이트/다크 아레나	관습		절차 설명에 따라 구성합니다. 너비 9.5cm, 깊이 9.5cm, 길이 55cm.
3개의 선반 벤치탑 하우징 시스템	수생 서식지	해당 사항 없음
1.5 L 산란 탱크(400 μm 배플	수생 서식지	해당 사항 없음
Ethovision XT 모션 트래킹 소프트웨어	Noldus 정보 기술
순수 곡물 에탄올	럭스코, INC	해당 사항 없음