Optokinetic Response Assay: 제브라피시의 시력을 측정하는 방법

초록

출처: Cameron, D. J., et al. 제브라피쉬의 시력의 정량적 측정으로서의 광상 반응. J. Vis. 특급.(2013년)

이 비디오는 제브라피쉬의 광역학 반응 분석을 설명합니다. 이 비디오는 시각적 움직임 자극을 기반으로 반사적 안구 움직임을 측정하고 제브라피쉬의 시력을 측정합니다.

프로토콜

1.옵토키네틱 반응 (OKR)

1. 직경 14.5cm의 회전 드럼, 광도 설정(300-8,000lux)을 조정할 수 있는 실체 현미경 및 컴퓨터를 사용하여 맞춤형 OKR 녹음 장치를 구축합니다(그림 1A).
   1. 현미경에 카메라를 부착하면 인접한 모니터에 실시간 피드를 제공하고 이미지를 캡처하고 기록할 수 있습니다.
   2. 다양한 속도 및 방향 선택을 수용할 수 있는 컴퓨터에 연결된 마이크로 컨트롤러를 사용하여 회전 드럼을 제어합니다.
2. 0.016% 트리카인에 물고기를 2-3분 동안 마취한 다음 눈과 아가미를 가장자리에 매달아 작은 플랫폼에 물고기를 놓습니다.
3. 물고기의 몸에 얇은 스폰지/수건을 놓고 물고기를 수용할 수 있는 모양의 거품 2-3개를 물고기 위에 고정하여 물고기를 움직이지 않도록 합니다. 물고기 꼬리의 움직임을 제한하는 것은 물고기에게 부상을 입히지 않고 고정하는 데 중요한 측면으로 밝혀졌으며 평평한 거품 조각을 사용하여 가장 잘 달성되었습니다. (그림 1B)
4. OKR 기록 장치의 회전 드럼 내부에 맞는 원통형 물이 채워진 탱크 안에 물고기를 놓습니다. 플랫폼에 있는 자석을 사용하여 눈이 드럼 가장자리에서 약 7.3cm 떨어진 곳에 물고기를 똑바로 세웁니다. 물고기는 몇 분 안에 마취에서 회복해야 합니다 - 정상적인 호흡이 재개되고 무작위 안구 움직임을 관찰해야 합니다.
5. 0.07 사이클 당 도 (cpd)의 기본 격자를 회전 드럼에 놓고 컴퓨터 컨트롤을 사용하여 회전 및 비디오 캡처를 시작합니다 (이 문서에는 12rpm의 속도가 사용되었지만 8-16 rpm의 속도는 비슷한 결과를 제공해야합니다).
6. 기본 격자에 의해 초기 OKR이 유도되면 회전을 잠시 중지하고 격자를 더 작은 격자(더 높은 공간 빈도)로 바꿉니다.
7. OKR을 더 이상 가져올 수 없을 때까지 이 프로세스를 반복합니다. 수정된 계단 접근 방식에 따라 OKR을 발생시킨 가장 작은 격자로 다시 테스트한 다음 응답을 유도하지 못한 격자를 사용하여 반복하여 OKR의 손실을 확인합니다. 이 과정을 반복하여 최종 격자가 첫 번째 소멸 사건에 대해 상대적으로 변경된 경우 감지 가능한 가장 작은 격자에 대한 진정한 응답을 확인할 수 있습니다.
8. 반대쪽 눈에 인접한 줄무늬 위에 검은색 플라스틱 폐색을 배치하여 단안 시력 측정을 얻습니다. 위의 절차를 반복합니다(단계 1.6-1.7).
9. 가림판의 위치를 조정하고 1.6-1.7단계를 다시 반복하여 반대쪽 눈의 시력을 얻습니다.
10. 다음 단계에서 정확한 시력 측정을 계산할 수 있도록 어항 아래의 참조 측정 스트립을 사용하여 테스트 절차 중에 각 눈이 줄무늬에서 떨어져 있는 거리를 기록하십시오.

2. 시력 계산

1. cpd를 계산하여 시력을 구합니다: 여기서 a는 렌즈 중심에서 격자까지의 거리이고 h는 OKR이 관찰된 가장 작은 격자의 한 주기의 길이입니다(그림 1C).
2. 결합된 시력 측정의 경우 왼쪽 눈과 오른쪽 눈의 평균 a-값이 사용됩니다.

결과

그림 1. OKR 녹음.A) OKR 장치는 14.5cm 직경의 회전 드럼과 광도 설정(300-8,000lux)을 조정할 수 있는 현미경으로 구성됩니다. 카메라는 인접한 모니터에 실시간 피드를 제공합니다. 회전 드럼은 시계 방향과 반시계 방향으로 다양한 속도 설정을 가지고 있으며, 필요에 따라 교체 가능한 공간 주파수 격자를 삽입 및 제거합니다. B) 물고기는 회전 드럼의 중앙에 고정되고 배치됩니다. C) 각도당 사이클(cpd)은 cpd=를 사용하여 계산됩니다.

재료

이 논문에 사용된 재료 목록

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