제브라피시 회피 및 티그모타시스 분석: 혐오스러운 시각적 자극에 대한 반응으로 유충의 행동을 조사하는 고처리량 방법

초록

출처: Richendrfer, H., et al. 제브라피시 유충의 자동화된 고처리량 행동 분석. J. Vis. 특급(2013년)

이 비디오는 제브라피시 유충의 회피 및 도둑 모타시스 분석을 설명합니다. 이 비디오는 시각적 혐오 자극에 반응하는 제브라피시 유충의 행동을 조사합니다.

프로토콜

1. 이미지 캡처

1. 플레이트의 각 레인에 최대 20 마리의 유충을 배치 할 수 있습니다. 일반적으로 레인당 5마리의 유충이 사용되어 수영 속도를 가장 정확하게 추적하고 실험당 필요한 유충 수를 줄입니다. 레인은 실험에 따라 의약품 또는 독성 물질이 있거나 없는 계란 물로 채울 수 있습니다. 그러나 레인은 이미징 캐비닛에 배치될 때까지 완전히 채워져서는 안 됩니다. 이렇게 하면 오버플로를 방지할 수 있습니다. 일관성을 위해 유충은 아가로스 주형에 넣고 노트북 화면 위에 놓은 후 10분의 순응 기간을 가져야 합니다. 유충을 페트리 접시에서 아가로스 레인으로 효율적으로 옮기면 유충 스트레스를 줄이는 데 도움이 됩니다. 이것은 유충이 얕은 수조나 페트리 접시에 보관되어 있을 때 가장 쉽습니다.
2. 이미징 캐비닛에는 타임랩스 촬영에 사용되는 Canon 디지털 카메라와 노트북이 포함되어 있습니다. 카메라는 캐비닛 상단에 배치하고 캐비닛 하단을 향하도록 해야 하며, 15.6인치 화면 노트북은 화면이 위를 향하도록 배치해야 합니다(그림 1). 4개의 플레이트는 노트북 화면 바로 위에 손으로 배치해야 합니다. 이때 레인은 계란물이나 화학 처리로 채워져 레인 상단과 수평이 되도록 할 수 있습니다(이미지에서 레인 가장자리의 그림자를 제거하기 위해).
3. PowerPoint 프레젠테이션은 유충에 대한 혐오적 자극으로 사용됩니다. 과거에는 움직이는 빨간 공이 6개 또는 12개의 멀티웰 플레이트에서 제브라피시 유충에게 표시되었습니다. 현재 PowerPoint는 15분 동안 빈 흰색 배경으로 시작한 다음 15분 동안 플레이트의 위쪽 절반에 움직이는 빨간색 막대가 표시됩니다(그림 2). 유충의 과열을 없애기 위해서는 화면 온도가 28 °C를 넘지 않는 노트북을 구입하는 것이 가장 좋습니다. 아가로스 레인 내에서 액체의 증발을 방지하려면 최대 이미징 시간을 1시간 미만으로 유지해야 합니다.
4. 디지털 카메라는 타임랩스 촬영을 위해 프로그래밍되어야 하며, 실험당 총 300개의 이미지를 위해 6초마다 사진을 촬영해야 합니다. 그러나 빈도와 길이는 실험과 행동 정량화에 따라 조정될 수 있습니다. 과거에는 각 이미지 사이의 더 긴 간격을 사용하여 이미징 시간을 연장하는 데 사용되었습니다. 비디오 속도(초당 30프레임)에서 이미징하기 위해 카메라를 더 낮은 해상도로 설정할 수 있습니다. 해상도가 낮을수록 단일 멀티웰 플레이트로 녹화가 제한되지만 비디오 녹화는 빠른 수영 이벤트를 이미징하는 데 적합합니다.

결과

그림 1. 이미징 캐비닛.이미징 캐비닛은 당사 실험실에서 특별히 제작되었으며 고처리량 동작 분석에 사용되었습니다. 15메가픽셀 디지털 카메라를 캐비닛 상단에 부착하여 아래를 향하게 하여 노트북 화면 상단에 배치된 멀티레인 플레이트에서 유충의 타임랩스 이미지를 수집했습니다. 플레이트와 스크린 사이에는 수집된 이미지에서 모아레 패턴을 방지하는 데 사용되는 플라스틱 디퓨저가 있습니다.

그림 2. 빈 배경과 PowerPoint 혐오 자극. 이것은 제브라피시 유충의 행동 변화를 불러일으키는 데 사용되는 현재 PowerPoint입니다.

재료

이 논문에 사용된 재료 목록

이름	회사	카탈로그 번호	댓글
이미징 캐비닛	우드크래프트 타워
아가로스	어부	BP1356-100
디지털 카메라	캐논 EOS	반란군 T1i
노트북	에이서 어스파이		15.6인치가 있는 한 모든 것이 좋습니다. 1366 x 768 픽셀 해상도와 220cd/m2 밝기의 LCD 화면.
하나의 웰 플레이트	어부	제12-565-493
파워포인트 2010	마이크로소프트
플라스틱 디퓨저	펜다플렉스	52345

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