제브라피시 광유전학: 유충 행동 반응을 연구하기 위해 유전자 변형 체성 감각 뉴런 활성화

초록

출처: Palanca A. M. S., et al. ChEF-tdTomato를 사용한 제브라피시 체성 감각 뉴런의 광유전학적 활성화. J. Vis. 특급 (2013).

이 비디오는 유전적으로 변형된 체성 감각 뉴런을 활성화하고 유도된 행동 반응을 고속 비디오 카메라로 기록하여 광유전학 기술을 설명합니다.

프로토콜

1. 행동 실험을 위한 산유충

1. ddH2O에 1.5% 저용융 아가로스를 만들고 응고를 방지하기 위해 42°C 가열 블록에 보관하십시오.
2. 유리 파스퇴르 피펫을 사용하여 사전 선별된 유충 중 하나를 가능한 한 적은 청색/배아 물이 함유된 1.5% 저용융 아가로스 튜브로 옮깁니다.
3. 아가로스 한 방울에 담긴 유충을 작은 페트리 접시에 옮깁니다.
4. 해부 현미경으로 유충의 등쪽을 위로 향하게 놓습니다.
5. 아가로스가 굳으면 얇은 면도날(#11 메스)로 아가로즈를 잘라내고 유충 전체에 한천 쐐기를 남깁니다.
6. 노른자의 양쪽에 두 개의 대각선으로 자릅니다.유충에 흠집이 나지 않도록 주의하십시오.
7. 아가로스 주변 지역을 배아/푸른 물로 채웁니다.
8. 유충의 몸통과 꼬리에서 아가로스를 당겨 빼냅니다(그림 1).

2 . 고속 카메라 및 이미징 소프트웨어 준비

1. 해부 스코프에 고속 카메라를 장착합니다.
2. 카메라를 컴퓨터에 연결합니다.
3. 컴퓨터를 켭니다.
4. 고속 카메....

결과

그림 1. 장착된 제브라피시 유충과 유충 접촉 반응에 관여하는 대표 뉴런의 다이어그램. 제브라피시 유충은 1.5% 저융점 아가로스(유충의 배쪽 부분을 둘러싼 점선으로 표시)에 부분적으로 장착되었습니다. 삼차 뉴런(머리)과 로혼 수염(Rohon-Beard) 뉴런(몸통)은 빨간색으로 표시됩니다. Mauthner 세포는 유충에서 점선으로 윤곽이 그려져 있습니다. 광 케이블(흰색)은 RB 뉴런 세포체 위에 위치하는 것으로 보입니다.

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재료

이 논문에 사용된 재료 목록

이름	회사	카탈로그 번호	댓글
낮은 용융 아가로스	시그마	A9045	또는 이에 상응하는
페트리 접시 (100x15mm)	어떤	어떤
비멸균 메스 블레이드	파인 사이언티픽 툴, Inc.	10011-00	또는 이에 상응하는
블루/배아 물			10L ddH2O 0.6g 인스턴트 오션 6 방울 메틸렌 블루
고속 카메라	AOS 테크놀로지스, Inc.	X-PRI (130025-10)	또는 이에 상응하는
유리 파스퇴르 피펫	어부	1367820B	또는 동등한(직경 10-15mm)
473nm 휴대용 레이저	크리스탈 레이저	CL-473-050	또는 더 높은 전력, TTL 옵션 포함
S48 자극기	Astro-Med, Inc. 잔디 기기 사업부	S48케이	또는 이에 상응하는
트리카인	시그마	A5040
200 μm 광섬유	토르랩스	AFS200/220Y-커스텀	패치 코드, 길이: 3m, 엔드 A: FC/PC, 엔드 B: FC/PC, 재킷: FT030
50 μm 광섬유	토르랩스	AFS50/125Y-커스텀	패치 코드, 길이: 3m, 엔드 A: FC/PC, 엔드 B: FC/PC, 재킷: FT030
24 배양 플레이트	제네시	25-102	또는 이에 상응하는

년 호