성체 제브라피시 전기생리학: 생체 내 뉴런의 세포 외 전기 활동을 측정하는 방법

초록

출처: Johnston, L., et al. 온전한 성인 제브라피쉬의 뇌에 전기생리학적 기록. J. Vis. 특급 (2013)

이 프로토콜은 성체 제브라피쉬에서 전기생리학을 수행하는 절차를 설명합니다. 이 방법은 생체 내에서 신경 활동을 측정하는 데 사용할 수 있습니다.

프로토콜

1. 전기생리학

1. 삽관 스톱 콕을 끄고 삽관 베이스와 트리카인 드립을 연결하는 Luer 잠금 장치를 빠르게 분리합니다.
   1. 원형(intact) 삽관 설정을 전기생리학 현미경으로 옮기고 관류 시스템에 연결합니다.
   2. 서식지 물을 켜고 트리카인을 씻어내기 위해 ~1시간 동안 1ml/분의 속도로 관류합니다.
2. 육안으로 제어할 수 있는 미세 조작기를 사용하여 전극 팁이 동물의 콧구멍이나 위턱 뒤의 움푹 들어간 곳에 삽입될 수 있도록 보조 전극을 배치합니다.
3. 1차 전극 바늘을 개두구 구멍에 삽입합니다. 바늘을 조직에 삽입하여 팁이 시신경 구조 내에서 상당히 표면적으로 위치하도록 합니다.
   1. 전극이 너무 깊으면 전기 신호가 작을 수 있습니다.
4. 1차 전극과 2차 기준 전극 사이에 기록된 전기적 차이를 수집하고 분석합니다. 이 과정을 통해 세포 외 기록을 얻을 수 있습니다.
   1. 갭 프리(Gap-free) 모드에서 0.1kHz의 저역 통과 필터와 1Hz의 고역 통과 필터를 사용하여 5kHz 샘플 레이트로 데이터를 수집합니다.
   2. 서식지수가 최소 45분 동안 관류될 때까지 전기생리학적 활동을 기록하기 시작하지 마십시오.
   3. 실험 약물을 추가하기 전에 최소 15분 동안 기본 활성의 기준선을 기록합니다. 선택한 실험 약물로 관류를 시작하고 원하는 시간 동안 기록합니다. 건강한 제제에서는 2-3 시간 동안 신경 활동을 기록 할 수 있습니다.

재료

이 논문에 사용된 재료 목록

이름	회사	카탈로그 번호	댓글
서식지 물			pH 7.0-7.4, 전도도 400-450 μS, 인스턴트 오션 및 에 의해 유지 관리 중탄산나트륨
0.4% 트리스 완충 트리카인	시그마-알드리치	E10521	pH 7.2-7.4; -20 oC에서 보관
60ml 루어 락 시린지 튜브	Becton, 디킨슨 앤 컴퍼니	309653
Luer 연결부가 있는 3방향 스톱콕
0.010(은선)	AM 시스템, Inc.
Q 시리즈 전극 홀더
Fisherbrand 100mm x 15mm 페트리 접시	피셔 사이언티픽	NC9299146
34G 경사진 바늘	월드 정밀 기기, Inc.	NF34BV
37cm × 42cm 킴 윕	킴벌리-클라크 프로페셔널	TW31KEM
직경 1/8 튜브
1mm 직경의 튜브
현미경 (Leica MZ APO)	다른 현미경을 사용할 수 있습니다

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