생체 내 Electroporation: 제브라피시를 transfection하는 현장 특정적 방법

초록

출처: Durovic, T., et al. 성체 제브라피시 텔렌스팔론에서 플라스미드 DNA의 생체 내 전달을 위한 전기천공법 방법. J. Vis. 특급 (2019).

이 비디오는 성체 제브라피쉬의 뇌실막세포로 DNA를 전달하는 기술인 생체 내 전기천공법에 대해 설명합니다.

프로토콜

1. 전기충격법

1. 스펀지에 물고기를 잡고 있는 상태에서 주입 설정에서 물고기를 제거합니다.
2. 전극 끝의 안쪽을 초음파 젤에 담그십시오.
3. 물고기 텔렌스팔론을 소량의 초음파 젤로 덮습니다.
4. 물고기 머리를 전극 사이에 놓고 양극을 물고기 머리의 복부 쪽에 놓고 음극을 등쪽 쪽에 배치하면서(그림 1C) 물고기의 몸을 스펀지에 고정합니다. 이것은 뇌실하 영역에 위치한 뇌실막을 전기천공하는 데 필요한 전류의 흐름 방향을 설정합니다.
5. 전극을 텔렌팔론에 대해 부드럽고 정확하게 누릅니다(그림 1 C). 풋 페달로 전류를 관리하십시오. 5개의 펄스가 모두 완료될 때까지 전극을 제자리에 유지합니다.

결과

그림 1: 제브라피시 텔렌스팔론(everted zebrafish telencephalon)의 관상 단면의 개략도.(A) 제브라피시 텔렌팔론(telencephalon)의 관상 단면 계획, 심실 표면을 감싸고 복부 심실 벽을 형성하는 뇌실막 세포(ependymoglial cell)의 위치를 강조합니다. 등쪽 ependymal layer는 두 반구를 연결하고 ependymoglial과 ependymal의 두 세포층 사이에 위치한 심실(V)을 덮고 있습니다. (B) 왼쪽에는 위에서 찍은 제브라피쉬 머리의 사진으로, 흰색 점선으로 텔렌스팔론의 위치를 강조하고 있습니다. 유리 모세관은 모세관 삽입을 위한 대상 부위와 함께 빨간색으로 표시되어 있습니다. 오른쪽 사진은 플라스미드 주입 위치를 빨간색으로 보여주는...

재료

이 논문에 사용된 재료 목록

이름	회사	카탈로그 번호	댓글
초음파 젤	SignaGel, Parker 연구소 INC	15-60	전극 젤
BTX 핀셋 전극	플래티넘 핀셋, BTX 하버드 장치	Tel.: 45-0486	1mm 직경
전기천공법 장치	BTX ECM830 구형파 전기천공법 시스템, BTX 하버드 장치	제45-0662

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