복강내 주사(Intraperitoneal Injection): 성체 제브라피시의 복강으로 용액을 전달하는 방법

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Abstract

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이 비디오는 성체 제브라피쉬의 복강에 용액을 전달하는 방법인 복강내 주사 기술에 대해 설명합니다.

Protocol

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

1. 복강내 주사를 통한 실험적 M. marinum 감염

희석된 박테리아 용액의 5μL 방울을 파라필름 필름 조각에 피펫으로 넣고 방울을 30G 인슐린 바늘로 당깁니다.
실험에는 5-8개월 된 야생형 물고기와 rag1-/-hu1999 돌연변이 물고기를 사용합니다. 0.02 % 3- 아미노 벤조산 에틸 에스테르 (pH 7.0)로 탱크 물에 성인 제브라 피쉬를 마취하십시오. 물고기 복부 쪽을 촉촉한 발포 플라스틱의 슬릿에 위로 향하게 놓습니다.
참고: 헝겊/돌연변이 물고기는 체세포 재조합을 겪을 수 없으며 기능적인 T 및 B 세포를 생산할 수 없습니다.
골반 지느러미 사이에 바늘을 약 45° 각도로 주입합니다. 바늘 구멍을 위쪽으로 유지하여 전체 구멍이 복강 내부에 있는지 관찰합니다. 박테리아 현탁액을 천천히 주입하고 바늘을 조심스럽게 제거합니다.
메모: 주입 시 물고기에서 빨간색 추적기가 누출되는 경우 물고기를 실험에서 제외하십시오.
주입 직후, 물고기를 담수 탱크 물이 있는 회수 탱크로 옮깁니다.
사용 중인 박테리아 분취액에서 15분마다 7H10 플레이트의 박테리아 현탁액 샘플을 채취....

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마이코박테리움 마리눔

아메리칸 타입 컬처 컬렉션

ATCC 927

페놀 레드

시그마-알드리치

P3532

인산염 완충 식염수 정제(PBS)

시그마-알드리치

P4417-50탭

미들브록 7H10 한천

BD, 써모 피셔 사이언티픽

11799042

3-아미노벤조산 에틸 에스테르(pH 7.0)

시그마-알드리치

A5040

Omnican 100 30G 인슐린 바늘

브라운

9151133

1mL 주사기

헨케 사스 울프

4010.200V0

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