복강내 주사(Intraperitoneal Injection): 성체 제브라피시의 복강으로 용액을 전달하는 방법

초록

출처: Luukinen, H., et al. Mycobacterium marinum 감염된 성체 제브라피쉬의 결핵 모델링. J. Vis. 특급 (2018).

이 비디오는 성체 제브라피쉬의 복강에 용액을 전달하는 방법인 복강내 주사 기술에 대해 설명합니다.

프로토콜

1. 복강내 주사를 통한 실험적 M. marinum 감염

1. 희석된 박테리아 용액의 5μL 방울을 파라필름 필름 조각에 피펫으로 넣고 방울을 30G 인슐린 바늘로 당깁니다.
2. 실험에는 5-8개월 된 야생형 물고기와 rag1-/-hu1999 돌연변이 물고기를 사용합니다. 0.02 % 3- 아미노 벤조산 에틸 에스테르 (pH 7.0)로 탱크 물에 성인 제브라 피쉬를 마취하십시오. 물고기 복부 쪽을 촉촉한 발포 플라스틱의 슬릿에 위로 향하게 놓습니다.
   참고: 헝겊/돌연변이 물고기는 체세포 재조합을 겪을 수 없으며 기능적인 T 및 B 세포를 생산할 수 없습니다.
3. 골반 지느러미 사이에 바늘을 약 45° 각도로 주입합니다. 바늘 구멍을 위쪽으로 유지하여 전체 구멍이 복강 내부에 있는지 관찰합니다. 박테리아 현탁액을 천천히 주입하고 바늘을 조심스럽게 제거합니다.
   메모: 주입 시 물고기에서 빨간색 추적기가 누출되는 경우 물고기를 실험에서 제외하십시오.
4. 주입 직후, 물고기를 담수 탱크 물이 있는 회수 탱크로 옮깁니다.
5. 사용 중인 박테리아 분취액에서 15분마다 7H10 플레이트의 박테리아 현탁액 샘플을 채취하여 29°C에서 5일 동안 박테리아를 배양하고 플레이트의 콜로니를 계수하여 감염 용량을 확인합니다.
6. 물고기의 안녕을 정기적으로 확인하고 감염 증상이 있는 물고기는 0.02% 이상의 농도의 3-아미노벤조산 에틸 에스테르(pH 7.0)로 안락사시킵니다.
   메모: 대략적으로 34 ± 15 CFU에 감염된 성체 제브라피쉬의 7%와 2029 ± 709 CFU에 감염된 제브라피쉬의 30%가 8주까지 증상이 나타날 것입니다. 증상에는 비정상적인 수영, 터치에 대한 반응 부족, 헐떡임, 부종 또는 관찰 가능한 소모가 포함될 수 있습니다.
7. 일반적인 기준에 따라 제브라피시를 유지하십시오.

재료

이 논문에 사용된 재료 목록

이름	회사	카탈로그 번호	댓글
마이코박테리움 마리눔	아메리칸 타입 컬처 컬렉션	ATCC 927
페놀 레드	시그마-알드리치	P3532
인산염 완충 식염수 정제(PBS)	시그마-알드리치	P4417-50탭
미들브록 7H10 한천	BD, 써모 피셔 사이언티픽	11799042
3-아미노벤조산 에틸 에스테르(pH 7.0)	시그마-알드리치	A5040
Omnican 100 30G 인슐린 바늘	브라운	9151133
1mL 주사기	헨케 사스 울프	4010.200V0