제브라피시 환자 유래 이종이식편(zPDX): 암 모델

초록

출처: Wang L. et. al., 비교 약물 평가를 위한 숙주로 제브라피시 유충을 사용하는 췌장암의 환자 유래 이종 이종 이식 모델. J. Vis. 특급 (2019).

이 비디오는 제브라피시 환자 유래 이종 이식 모델을 만드는 기술을 설명합니다. 샘플 프로토콜에서는 췌장 종양 이종이식 모델에서 Gemcitabine 및 Navitoclax 약물의 효율성을 평가합니다.

프로토콜

1. 제브라피쉬에 혼합 세포 현탁액 주입

1. E3 물에 10x 트리카인 용액을 첨가하여 제브라피시 유충을 마취하고 유충(단계 2.3)을 변형된 E3(1g/L 글루코스 및 5mmol/L L-글루타민이 함유된 E3)로 채워진 주입 플레이트로 옮깁니다.
2. 25μL의 혼합 세포 현탁액을 마이크로 모세관 바늘에 채우고 바늘을 마이크로 주입 매니퓰레이터에 삽입합니다.
3. 사출 압력과 시간을 설정합니다. 50-80 세포(~8 nL)를 48 hpf 제브라피쉬의 난황낭에 주입합니다.

2. 이종 이식 제브라피쉬의 배양 (zPDX 모델)

1. 이종 이식 후 제브라피시 유충을 32°C에서 40mL의 혼합 용액(1g/L 포도당 및 5mmol/L L-글루타민이 있는 E3 용액)으로 옮깁니다.

3. 이종이식된 제브라피쉬에 대한 약물 투여 및 종양 세포/섬유아세포 생존력 평가

1. gemcitabine/navitoclax의 최적 농도 결정.
   1. 10개의 야생형 제브라피시 배아를 48hpf로 12웰 플레이트의 각 웰에 넣습니다.
   2. 각 웰에 다른 농도의 젬시타빈 또는 나비토클락스를 넣고 32°C에서 2일 동안 배양합니다.
   3. 2일 후, 제브라피시 유충이 심각한 기형 및 비정상적인 행동을 보이지 않고 작업 농도가 MTD 미만으로 설정되는 gemcitabine 및 navitoclax의 최대 허용 오차 투여량(MTD)을 계산합니다.
2. gemcitabine/navitoclax를 사용한 zPDX 모델 치료.
   1. 10개의 이종이식된 유충을 12개의 웰 플레이트의 각 웰에 놓습니다.
   2. 유충을 4개 그룹으로 나누고, 대조군은 0.1% DMSO를 함유한 E3로 처리하고, 다른 그룹은 5μg/mL 젬시타빈 및/또는 50μM 나비토클락스로 처리하고, 32°C에서 2일 동안 배양합니다.
3. zPDX 모델의 세포 생존율 및 세포 구성 평가.
   1. 이종 이식 된 유충을 치료 후 마취하고 3 % 메틸 셀룰로오스에 놓습니다.
   2. 형광 현미경 또는 컨포칼 현미경을 사용하여 측면에서 볼 때 유충을 분석합니다.
   3. ImageJ 및 GraphPad 소프트웨어를 사용하여 적색 및 녹색 형광 신호의 강도를 정량화할 수 있습니다.

재료

이 논문에 사용된 재료 목록

이름	회사	카탈로그 번호	댓글
L-글루타민	지브코	21051024
젬시타빈	겜잔
메틸셀룰로오스	시그마	M0262
나비토클락스(ABT-263)	셀렉	S1001	Bcl-xL 억제제
설비
마이크로인젝터	나리시게
컨포칼 현미경	라이카	SP8	0.00

시리즈 호