방법 논문

심장 박리: 제브라피시 심장 발달을 관찰하는 방법

2023년 4월 30일

이 논문에서

초록

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출처: Singleman C. et. al., Heart Dissection in Larval, Juvenile and Adult Zebrafish, Danio rerio. J. Vis. 특급 (2011).

이 비디오는 심장 발달, 성숙 및 노화를 연구하기 위해 여러 발달 단계에서 제브라피시로부터 심장을 분리하는 기술을 설명합니다.

프로토콜

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

1. 물고기 측정 및 해부

  1. 신선한 PBS를 반쯤 채운 페트리 접시에 생선 한 마리를 넣고 오른쪽에 놓습니다.
  2. 디지털 mm 캘리퍼를 사용하여 꼬리 지느러미를 포함하지 않고 주둥이에서 꼬리 기저부(꼬리 꽃자루)까지 물고기의 길이를 측정합니다(그림 1). 이것이 표준 길이(SL)입니다.
  3. 각 물고기에는 숫자/문자 조합을 할당하여 개별 물고기와 그에 따라 해부된 심장을 추적하여 나중에 분석할 수 있습니다. 부모의 재고 번호, 고정 연령, SL 측정을 포함한 데이터는 스프레드시트에 입력되고 이러한 레이블을 기반으로 구성되었습니다.
  4. 해부 전에 PCR 튜브 스트립에 추적 번호가 할당된 라벨을 붙이고 PBT 또는 추가 분석에 적합한 기타 용액으로 채웁니다.
  5. 페트리 접시에서 물고기의 복부 쪽이 위로 향하게 하고 눈을 눈과 아가미 사이에 머리를 고정하는 집게로 몸을 안정시킵니다(그림 1).

작은 물고기 (12mm SL 미만) :

  1. a) 날카로운 집게를 사용하거나 핀 홀더의 미세 바늘을 사용하여 몸에서 가슴 근육과 지느러미를 제거하여 심장을 드러냅니다. 해부 중 겸자의 지속적인 움직임은 물고기를 움직이는 PBT의 전류를 유발할 수 있습니다. 이것은 특히 작은 물고기에게 문제가 되므로 마이크로 바늘을 사용하여 가슴 근육과 지느러미를 제거하고 체강을 열 수 있습니다.
  2. a) 집게를 부드럽게 사용하여 심방 아래의 구멍에서 심장을 퍼냅니다. 또는 일부 물고기의 경우 구근을 부드럽게 당겨 심장을 제거할 수 있으며 나머지 심장도 따라갈 수 있습니다. 이 기술을 사용하는 경우 아트리움이 쉽게 손상될 수 있으므로 아트리움의 위치에 주의하십시오. 심장과 함께 오는 여분의 조직이 있으면 괜찮으며 나중에 제거할 수 있습니다.
  3. a) 물고기에 Tg(myl7:GFP)twu34와 같은 형광 심장 마커가 포함되어 있는 경우 형광 내시경을 사용하여 해부하고 형광에 의한 심장 제거를 확인합니다(그림 2).
  4. a) 심장이 강에서 제거되면 집게를 사용하여 심장을 잡고 마이크로 바늘을 사용하여 심장 바깥쪽에서 여분의 비심장 조직과 심외막 내벽을 제거합니다.

큰 물고기 (12mm SL 이상) :

  1. b) 스프링 손잡이가 있는 마이크로 가위를 사용하여 깊이가 1mm 미만인 절개를 3개 만듭니다: 1- 아가미를 가로 절단, 2- 앞쪽 배를 가로 절단, 3- 두 절단을 연결하는 복부 측의 시상 절단(그림 3).
  2. b) 날카로운 집게를 사용하여 몸에서 가슴 근육과 지느러미를 제거하여 체강을 열고 심낭의 은빛 조직을 드러냅니다(그림 4A). 이 심낭 조직을 제거하면 심장이 보이게 됩니다(그림 4B).
  3. b) 마이크로 가위를 사용하여 심장 위쪽에 위치한 구근 동맥에 연결된 동맥을 절단합니다. 이 동맥이 절단되면 집게 끝을 심방 아래에 놓고 집게를 사용하여 심장을 구멍에서 퍼냅니다. 심장과 함께 오는 여분의 조직이 있으면 괜찮으며 나중에 제거할 수 있습니다.
  4. b) 심장이 강에서 제거되면 두 개의 집게를 사용하여 심장을 잡고 여분의 조직을 제거하거나 한 쌍의 집게를 사용하여 심장을 잡고 마이크로 바늘을 사용하여 심장이 아닌 여분의 조직을 제거합니다. 검은색 색소 침착으로 명백한 심외막 내막은 원하는 경우 조직을 부드럽게 긁어내어 심장 바깥쪽에서 제거할 수 있습니다.

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결과

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그림 1.눈과 아가미 사이에 집게로 물고기를 잡습니다.

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그림 2.여기에 표시된 Tg(myl7:GFP)twu34와 같은 심장 특이적 형광 형질 전환 마커는 작은 물고기에서 해부된 심장을 시각화하는 데 도움이 될 수 있습니다.

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그림 3.가슴 근육과 피부를 제거하기 위한 세 가지 절개...

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재료

이 논문에 사용된 재료 목록
이름회사카탈로그 번호댓글
겸자 #55 정밀 과학 도구11295-51
마이크로 가위 정밀 과학 도구15005-08
핀 홀더정밀 과학 도구26016-12
마이크로 바늘정밀 과학 도구10130-10
페트리 접시 BD 바이오사이언스351029
년 년 년 년

재인쇄 및 허가

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