제브라피시 심근병증 모델: 약물 유발 심장독성

초록

출처: Ma X., et. al. 성인 제브라피쉬의 독소루비신 유발 심근병증 모델. J. Vis. 특급 (2018).

이 비디오는 실험군 간의 변동을 최소화하면서 제브라피시 심근병증 모델을 만드는 기술을 설명하며, 샘플에서는 독소루비신이라는 약물을 사용하여 제브라피시 심근병증 모델을 만듭니다.

프로토콜

1. 성체 물고기에 DOX 주입

1. 스펀지가 들어 있는 깨끗한 100mm 페트리 접시를 해부 현미경 아래에 놓고 초점을 조정합니다. 스펀지를 잘라 물고기를 담을 수 있는 약 4cm 길이의 구멍을 만듭니다. 더 큰 물고기를 위해 더 긴 구멍을 만드십시오.
2. 10μL 마이크로 주사기로 34G 바늘을 준비합니다. 1x HBSS 버퍼로 바늘을 헹구어 주사기와 튜브에서 기포와 블록을 제거합니다.
3. 0.16mg/mL 트리카인이 함유된 배아수에서 성어를 2분 동안 마취합니다.
   참고: 5분 이상 마취한 후 DOX 주사를 하면 물고기가 쉽게 죽을 수 있습니다.
4. 스펀지를 트리카인이 함유된 배아 물에 담그고 물고기를 스펀지에 옮겨 주입합니다.
5. 아래 설명된 두 가지 방법 중 하나로 IP DOX 주입을 수행합니다.
   1. 클래식 IP 인젝션
      1. 복부가 위로 향하게 한 물고기를 스펀지의 구멍에 놓습니다. 물고기 몸체에 대해 45° 각도로 바늘을 골반 지느러미 사이의 정중선에 빠르게 삽입하고 약 1-2mm를 관통합니다. 모든 DOX 솔루션을 천천히 릴리스합니다. 바늘을 뽑기 전에 5초 동안 기다리십시오. 물고기 뱃속에서 눈에 띄는 붉은색으로 DOX 전달을 확인하십시오.
   2. 대체 IP 주입
      1. 앞쪽이 오른쪽에 오도록 하여 물고기를 스펀지 위에 옆으로 놓습니다. 왼손으로는 뭉툭한 집게를 사용하여 물고기를 부드럽게 안정시키고 오른손으로는 마이크로 주사기를 잡습니다.
      2. 바늘을 골반 지느러미 위의 측선 아래에 놓고 베벨이 위를 향하도록 합니다. 7시 방향을 45° 각도로 가리키며 골반과 항문 지느러미 사이에 위치한 물고기 구멍에 바늘을 3-4mm 삽입한 다음 플런저를 천천히 누릅니다. 물고기 뱃속에서 눈에 띄는 붉은색으로 DOX 전달을 확인하십시오.
6. 주입된 물고기를 신선한 시스템 물로 채워진 깨끗한 건널 수조로 빠르게 옮겨 물고기가 회복할 수 있도록 합니다. 주사 사이에 1x HBSS 버퍼로 바늘을 한 번 헹굽니다.

재료

이 논문에 사용된 재료 목록

이름	회사	카탈로그 번호	댓글
교차점 탱크	아쿠아니어링	ZHCT100	물고기 사육
독소루비신 염산염	시그마	D1515-10MG
행크의 균형 잡힌 소금 용액(HBBS)	써모피셔	14025076	DOX용 차량
100mm 페트리 접시	송골매	431741
10μL NanoFil 마이크로 주사기	WPI (영어)	(주)나노필	주입용
34 게이지 바늘	WPI (영어)	NF34BV-2	주입용
트리카인	은빛십자군		물고기 마취