용량 증량: 암세포에서 약물 내성을 개발하는 방법

초록

출처: Yamaoka T. et al., Establishment and Characterization of Three Afatinib-resistant Lung Adenocarcinoma PC-9 cell lines developed with increasing doses of Afatinib. J. Vis. 특급, 2019

이 비디오는 이전에 MTT 분석으로 약물의 IC₅₀ 값을 계산한 후 세포를 약물의 용량 증가에 노출시켜 암세포의 약물 내성 발달을 설명합니다. 샘플 프로토콜은 약물 내성 세포를 개발하는 단계별 프로세스를 설명합니다.

프로토콜

1. 3개의 독립적인 Afatinib 내성 PC-9 세포주 확립

1. 3-(4,5-dimethylthiazol-2-yl)-2,5-diphenyltetrazolium bromide(MTT) 분석을 사용하여 PC-9 세포에 대한 초기 afatinib 노출 농도 측정.
   1. 37°C에서 5% CO₂ 인큐베이터에서 소 태아 혈청(10%), 페니실린(100 U/mL) 및 스트렙토마이신(100 μg/mL)을 함유하는 성장 배지에서 PC-9 세포를 배양합니다.
   2. 성장 배지에서 PC-9 세포를 4 x 10⁴ cells/mL로 재현탁한 다음 96웰 마이크로플레이트에서 50 μL/웰로 시딩합니다. 세포의 최종 농도는 2.0 x 10³ cells/50 μL/well입니다. 37°C의 5% CO₂ 인큐베이터에서 하룻밤 동안 배양합니다.
   3. 성장 배지(50μL)가 포함된 웰에 0, 0.002, 0.006, 0.02, 0.06, 0.2, 0.6, 2, 6 및 20μM의 다양한 농도로 50μL의 아파티닙 용액을 추가합니다. 아파티닙의 최종 부피 및 농도는 각각 100μL 및 0, 0.001, 0.003, 0.01, ....

재료

이 논문에 사용된 재료 목록

이름	회사	카탈로그 번호	댓글
FBS(증권 시세	지브코	제26140-079
펜 스트렙	지브코	15140-163
세포 배양 처리 된 10cm 접시	비올라모	2-8590-03
아파티닙	셀렉	S1011
96웰 마이크로플레이트	열	130188
셀티터 96	프로메가	G4100	비방사성 세포 증식 분석법; 염료 용액 및 Solubilization/Stop 용액
NanoDrop Lite 분광 광도계	열	해당 없음	분광 광도계
GraphPad Prism v.7 소프트웨어	그래프패드, Inc.	해당 없음	통계 소프트웨어
디엠소	와코	TEL.043-07216

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