포르말린 고정 파라핀 포매 종양 샘플의 준비: 비소세포폐암(NSCLC)의 조직 및 세포학 샘플을 보존하기 위한 프로토콜

초록

출처: Ilié, M., et al. 비소세포폐암 환자의 생검 및 세포학 샘플에 22C3 항 PD-L1 항체 농축액을 사용합니다.J. Vis. 특급 (2018).

이 프로토콜은 비소세포폐암(NSCLC)의 조직 및 세포학 샘플을 보존하는 데 사용되는 포르말린 고정 파라핀 포매 종양 샘플의 준비를 설명합니다.

프로토콜

1. 종양 조직 샘플의 준비

1. 카세트에서 10% 중성 완충 포르말린(NBF)으로 종양 조직을 고정합니다.
   메모: 근위 폐 종양의 종양 조직은 일반적으로 기관지 내시경 검사로 채취하며, 호흡기 전문의 또는 폐 전문의가 중등도의 진정 투여를 실시합니다. 말초 병변 및 미만성 폐 질환의 경우 경기관지 또는 바늘 생검이 필요합니다. 이러한 절차는 일반적으로 수술실이나 중환자실에서 수행됩니다.
2. 카세트를 paraffin.
   에 삽입합니다. 메모: 고정은 해부 직후 관류 또는 침지로 달성할 수 있으며 일반적으로 8-10시간이 필요합니다. 고정 부피는 시편 부피보다 15-20배 높아야 합니다. 생검 조직을 10시간 이상 고정하는 것은 항원의 마스킹을 유발할 수 있으므로 권장하지 않습니다. 정착 속도는 실내 온도에 대략 1 mm/h입니다.
3. 조직 처리기에 왁스로 고정 조직 샘플을 침투시킵니다(재료 표 참조).
   메모: 탈수는 농도가 70%, 85%, 90%로 증가하는 세 가지 알코올 수조에서 수행됩니다. 물은 최종적으로 세 번의 최종 절대 알코올 수조로 제거됩니다. 세척은 3 개의 톨루엔 욕조에서 수행되며 왁스 침투는 뜨거운 왁스 욕조 (44-60 ° C)에서 수행됩니다.
4. 용융된 파라핀으로 채워진 주형 내부에 조직을 삽입하고(재료 표 참조) 응고를 기다립니다.
5. 파라핀이 함유된 조직을 마이크로톰에서 3μm 두께로 절단합니다.
6. 파라핀 리본을 양전하를 띤 현미경 유리 슬라이드로 옮깁니다(재료 표 참조).
7. 슬라이드를 37°C에서 1시간 동안 건조합니다.
   참고: 조직 절편은 항원성을 보존하기 위해 2–8°C(권장) 또는 최대 25°C의 실온에서 보관하고 절편 후 15일 이내에 염색합니다.

2. 세포학 샘플 준비

1. 방부제에 기관지 세척제를 모으십시오(재료 표 참조).
   메모: 이를 위해 표준 기관지 내시경 기술이 사용됩니다.
   1. Lavage: 샘플링할 기관지의 분포를 분석합니다. 깨끗한 용기에 세척액을 모으십시오. 용기에 환자의 이름과 성, 생년월일, 검체 출처를 표시하십시오.
2. 기관지 세척제를 50mL 원뿔형 튜브에 옮기고 DL-Dithiothreitol 분말 2g(재료 표 참조)을 넣고 튜브를 30분 동안 와류로 처리한 다음 실온에서 250 x g에서 5분 동안 원심분리합니다.
3. 상층액을 제거하고 점액 용해 용액 10mL를 추가합니다(재료 표 참조).
4. 샘플을 중간 속도(레벨 9)로 20분 동안 흔든 다음 실온에서 250 x g으로 5분 동안 원심분리합니다.
5. 상층액을 제거하고 10% NBF가 포함된 수집 튜브에 세포 펠렛을 증착합니다.
6. 세포 블록 준비 시약 4방울(재료 표 참조)을 세포 펠릿에 추가합니다.
7. 세포 펠릿을 카세트로 옮기고, 10% NBF에 고정하고, 세포 블록 준비 및 절편화를 위해 파라핀으로 삽입합니다(1.1–1.7 단계 참조).

재료

이 논문에 사용된 재료 목록

이름	회사	카탈로그 번호	댓글
노바프렙 HQ1	노바시트	해당 없음	방부제 솔루션 세포학 표본
노바프렙® HQ+ B	노바시트	해당 없음	점액 용해 용액
티슈텍 VIP 6	사쿠라	6042 VIP 6
Tissue-Tek TEC 5 티슈 Embedding Console 시스템	사쿠라	5229 텍 5
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