방법 논문

BrdU 면역형광 염색: 세포 주기의 여러 단계에서 세포를 식별하는 기술

2023년 4월 30일

이 논문에서

초록

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출처: Welschinger, R., et al. 동기화 없이 유세포 분석을 사용하여 세포 주기 진행의 시간적 추적. J. Vis. 특급 (2015).

이 동영상은 BrdU 면역형광 염색 프로토콜에 대해 설명합니다. 이 기술을 사용하면 세포주기의 여러 단계에서 세포를 식별 할 수 있습니다. DNA 염료 및 항체 표지를 추가하면 나중에 S기 세포의 운명을 자세히 분석할 수 있습니다.

프로토콜

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

1. 솔루션 및 시약

  1. 완전한 RPMI
    1. 56ml의 송아지 혈청(FCS)과 5.5ml의 200mM L-글루타민을 RPMI-1640 배지 500ml 병에 추가합니다.
  2. DNase 솔루션
    1. DPBS로 1mg DNase/ml를 준비합니다.
  3. 염색 완충액
    1. DPBS에서 3% 열 불활성화 FCS와 0.09% 아지드화나트륨을 준비합니다.
  4. Fixation Buffer, Permeabilization Buffer 및 Wash Buffer의 정의는 Materials List를 참조하십시오.

2. 세포 염색

참고: 세포의 표면 염색이 필요한 경우 고정 전에 이를 수행하여 세포가 전체적으로 4°C로 유지되도록 합니다.

  1. 100 μl의 염색 완충액에 세포를 재현탁시킵니다(선택적 표면 염색의 경우, 권장 부피의 항체를 표면 항원에 추가하고 4 °C에서 30분 동안 배양).
  2. 염색 완충액 1ml를 넣고 150 x g에서 5분 동안 원심분리한....

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공개 사항

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,
선언된 이해 상충이 없습니다.

재료

이 논문에 사용된 재료 목록
이름회사카탈로그 번호댓글
APC BrdU 플로우 키트 BD 바이오사이언스552598BrdU 항체, 7-AAD 및 BD Cytofix/Cytoperm Buffer(Fixation Buffer라고 함) 포함
BD 펌/워시 버퍼BD 바이오사이언스554723세척 버퍼라고 합니다.
BD Pharmingen 얼룩 완충제BD 바이오사이언스554656
피펫맨길슨P2, P20, P100, P1000
DNase시그마D-4513
BD Cytoperm 투과화 완충액 플러스BD 바이오사이언스561651투과화 버퍼라고 합니다
원심 분리기 스핀트론 GT-175R
AF488 anti-Histone H3 Phospho (Ser10) 항체 세포 신호 전달 9708년대
Phospho-Chk2 (Thr68) (C13C1) 토끼 mAb세포 신호 전달 2197초
Phospho-Chk1 (Ser345) (133D3) 토끼 mAb 세포 신호 전달 2348초
BD Falcon 12 x 75mm FACS 튜브 BD 바이오사이언스352008
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태그

DNAseDNASNALM 67 AAD

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