G-10 컬럼 기반 백혈병 세포 분류: 골수 기질 세포에서 급성 림프구 백혈병 세포를 정제하는 방법

초록

출처: Slone, W. L.,et al. 체외 화학 요법 저항성 백혈병 모델링. J. Vis. Exp. (2016).

이 동영상은 겔 타입 10 가교 덱스트란 G-10 컬럼을 사용하여 골수 기질 세포에서 급성 림프구 백혈병 세포를 분리하는 방법을 설명합니다. 이 방법은 부착된 골수 기질 세포 아래로 이동한 종양 세포 집단을 복구하여 "위상 희미한" 종양 세포 집단을 생성하는 데 도움이 됩니다.

프로토콜

1. G10 컬럼에 공동 배양 세포 로딩

참고: G10 열에 셀이 포함된 미디어를 추가하기 전에 스톱콕이 완전히 닫혀 있는지 확인하십시오. 또한 다운스트림 분석에서 모집단 간에 편향이 발생하지 않도록 각 하위 모집단을 별도의 G10 열에 걸쳐 실행해야 합니다.

1. 1,000μl 피펫을 사용하여 예열된 배지의 각 세포 subpopulation을 1ml를 별도의 G10 컬럼에 적하 방향으로 추가합니다. 세포를 포함하는 매체가 G10 펠릿 상단 또는 내에 남아 있는지 확인합니다. 세포가 RT.
   에서 20분 동안 G10 펠릿에서 배양하도록 합니다. 메모: 마개는 부화 기간 동안 닫혀 있습니다.

2. G10 Column에서 백혈병 세포 수집

1. 각 G10 컬럼에 1-3ml의 예열 매체를 추가합니다. 스톱콕 밸브를 열고 매체가 컬럼에서 천천히 드롭 방향으로 빠져나오도록 합니다.
   메모: 컬럼에서 느린 유속을 유지하는 것이 중요하며, 그렇지 않으면 BMSC/OB가 포함된 G10 펠릿이 컬....

재료

이 논문에 사용된 재료 목록

이름	회사	카탈로그 번호	댓글
G10 세파덱스 비즈	시그마	G10120	원고에서는 gel type 10 cross-linked dextran particles로 지칭
10ml 멸균 주사기	BD (영어)	309604
1방향 스톱콕	월드 정밀 기기, Inc.	14054-10
인간 조골세포	프로모셀	C-12720	인간 조골세포는 공급자의 권고에 따라 배양하였다.
인간의 뼈 Morrow 기질 세포	WVU 생체 표본 코어		비식별화된 원발성 인간 백혈병 및 골수 기질 세포(BMSC)는 Mary Babb Randolph Cancer Center(MBRCC) 생체 표본 처리 코어 및 West Virginia University Department of Pathology Tissue Bank에서 제공했습니다. BMSC 배양은 앞서 설명한 바와 같이 확립되었습니다(*)
0.05% 트립신	미디어테크, Inc.	25-053-CI
레(REH)	증권 시세	ATCC-CRL-8286	REH 세포는 공급자의 권장 사항 및 권장 배지에 따라 배양되었습니다.
유리솜	파이렉스	3950
50ml 원추형 원심분리기 튜브	월드 와이드 의료 제품	41021039	수집 튜브로 사용
15ml 원뿔형 원심분리기 튜브	월드 와이드 의료 제품	41021037	세포 채취에 사용
소 태아 세럼	시그마	F6178
SD-1	디에스엠즈	ACC 366	SD-1은 공급업체의 권장 사항 및 권장 배지에 따라 배양되었습니다.
100 x 20mm 세포 배양 접시	Greiner 바이오 원	664160

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