쥐 뒷다리에서 채취한 골수

초록

출처: Zhu, Y. P., Padgett, et al. 호중구 계통 세포의 대량 세포 분석을 위한 전체 골수 준비. J. Vis. 특급 (2019).

이 비디오는 백혈병과 같은 혈액 질환이 있는 환자의 전체 BM 결함을 조사하기 위해 마우스의 뒷다리에서 신선한 전체 골수를 분리하는 자세한 프로토콜을 설명합니다.

프로토콜

1. 수확 마우스 골수(BM)

1. 상업용 공급업체에서 C57BL/6J 마우스를 구입합니다. 표준 설치류 차우 식단을 먹이고 병원체가 없는 시설의 미세 격리 케이지에 수용합니다.
2. 실험 목적으로 6-10 주령의 수컷 마우스를 사용하십시오. CO₂ 흡입 후 경추 탈구로 안락사시킵니다.
3. 복부 쪽이 위로 향하게 하여 멸균 수술 패드에 마우스를 놓습니다. 복부와 뒷다리 부위의 피부를 70% 에탄올을 분사하여 살균합니다. 절개 수술용 가위를 사용하여 복강을 절개합니다.
4. 뒷다리를 노출시키기 위해 피부를 제거하십시오. 뭉툭한 끝의 드레싱 집게를 사용하여 발목 바로 아래에 있는 쥐 경골을 잡습니다. 다른 한 쌍의 곡선형 드레싱 집게를 사용하여 뭉툭한 팁 드레싱 집게 아래의 경골을 안정화합니다. 뭉툭한 팁 드레싱 집게로 근육을 뜯어내어 경골을 부러뜨리고 뼈를 노출시킵니다.
   메모: 경골은 무릎 관절에 느슨하게 부착되어 있으며 뭉툭한 팁 드레싱 집게를 사용하여 쉽게 선택할 수 있습니다.
5. 경골을 차가운 1x PBS에 놓습니다.
6. 그런 다음 안정화 곡선 드레싱 겸자를 대퇴골 쪽으로 아래쪽으로 움직입니다. 뭉툭한 드레싱 집게를 무릎 관절 아래로 밀어 슬개골을 잡습니다. 슬개골을 부드럽게 위로 당겨 탈구시킵니다. 슬개골에 부착된 근육을 뜯어내어 대퇴골을 노출시킵니다. 곡선형 드레싱 겸자로 노출된 대퇴골을 잡고 절개 수술용 가위를 사용하여 뼈 바닥에서 대퇴골을 잘라냅니다.
7. 대퇴골을 차가운 1x PBS에 놓습니다.
8. 18G 바늘로 0.5mL 마이크로 원심분리기 튜브에 구멍을 뚫습니다.
9. 경골과 대퇴골을 모두 동일한 0.5mL 미세 원심분리기 튜브에 뼈의 열린 끝이 구멍의 아래쪽을 향하도록 놓습니다.
10. 경골과 대퇴골이 모두 포함된 0.5mL 튜브를 1.7mL 마이크로 원심분리 튜브에 넣습니다.
11. 마이크로 원심분리기에서 경골과 대퇴골을 모두 포함하는 이중층 튜브를 5,510 x g에서 30초 동안 회전시킵니다.
12. BM이 뼈에서 추출되어 튜브 바닥에서 펠릿화되었는지 확인합니다. 신성한 뼈가 들어 있는 0.5mL 튜브를 던집니다. 마우스 BM은 다음 단계를 수행할 준비가 되었습니다.

재료

이 논문에 사용된 재료 목록

이름	회사	카탈로그 번호	댓글
마우스: C57BL/6J	잭슨 연구소	재고번호: 000664
HyClone 인산염 완충 식염수 용액	GE 라이프사이언스	고양이#SH30256.01