인간 참가자와 관련된 모든 절차는 인간 복지를 위한 제도적, 국가적, 국제적 지침에 따라 수행되었으며 지역 기관 검토 위원회의 검토를 거쳤습니다.
1. 골수 흡인 및 검체 준비
- 환자 및 재료 준비
- 16게이지 바늘을 사용하여 10mL 주사기 1개 또는 2개에 1% 리도카인을 채웁니다. 바늘을 21게이지 바늘로 교체하십시오.
- 시계 유리에 5% EDTA 두 방울을 떨어뜨립니다.
- 도말 준비를 위해 유리 슬라이드(일관된 환자 번호와 날짜가 있는 n=15)를 설정합니다.
- 환자를 측면 욕창 위치에 놓습니다. 상부 후방 장골 척추를 찾아 pen.
로 표시합니다.
메모: 일반적으로 후방 상장골 척추는 장골능 원위부에 한 손 너비, 정중선 측면에 한 손 너비에 위치합니다. 여성의 경우 실제 척추는 약간 더 측면일 수 있으며 일부 남성의 경우 약간 더 내측일 수 있습니다.
- 클로르헥시딘 0.5-1%의 에탄올을 함유한 피부를 의도한 생검 부위에서 바깥쪽으로 원을 그리며 소독합니다.
- 멸균 장갑 패키지를 열고 멸균 장갑을 착용하고 패키지를 테이블 위에 놓아 멸균 필드를 만듭니다. 흡인 바늘이 있는 패키지를 열고 멸균 필드에 놓습니다.
- 피부와 피하 조직에 침투하여 마지막으로 골막에 침투합니다. 골막에서 직경 1cm의 부위가 마취되는 방식으로 리도카인을 투여합니다.
메모: 골막에 리도카인을 적절하게 투여하는 것은 환자의 편안함을 위한 가장 중요한 요소 중 하나입니다. 삽입된 바늘로 의도한 생검 위치를 두드려 골막이 적절하게 마취되었는지 테스트하고 환자에게 통증을 느끼는지 묻습니다. 참고: 어린이는 전체 절차 동안 완전히 마취됩니다.
흡- 인 바늘(15Ga x 2.8")을 손바닥의 근위 끝과 검지 손가락으로 끝 근처의 바늘 금속 샤프트 측면에 대고 잡습니다. 이 위치를 사용하면 더 잘 제어할 수 있습니다.
- 피부를 통해 장골척추를 향해 회전하는 움직임(내전/외전을 빠르게 번갈아 가며)으로 바늘을 삽입하고 바늘을 후방 장골 척추에 접촉시킵니다.
- 바늘이 골막의 마취한 지역에 소개된다는 것을 확인하십시오; 환자는 압력만 느끼고 고통은 느껴야 합니다. 환자가 통증을 느끼면 바늘의 위치를 바꾸거나 리도카인을 더 투여한다.
- 부드럽지만 단단한 압력을 사용하여 바늘을 시계 방향-시계 반대 방향으로 번갈아 회전시키면서 바늘을 전진시킵니다. 골수강 진입은 일반적으로 저항력 감소에 의해 감지됩니다.
- 바늘에서 탐침을 제거합니다. 10mL의 빈 주사기를 바늘에 부착합니다.
- 주사기 플런저를 부드럽게 당겨 빼내어 음압을 가합니다. 환자에게 골수를 흡인할 때 경련과 통증을 느낄 수 있음을 경고합니다. 골수 스피큘이 충분히 방출되지 않으면 한 번의 빠른 드로우로 다른 흡인을 수행해야 합니다. 대부분의 스피큘은 초기 당김에서 얻은 처음 1-2mL에 있습니다. 샘플이 희석되지 않도록 1-2mL만 흡입하십시오.
메모: 희석하면 혈액 희석이 발생하고 MRD 결과가 혼동될 수 있습니다.
- 주사기를 제거하고 탐침을 흡인 바늘에 다시 넣습니다. 골수의 일부를 시계 유리로 꺼내고 나머지는 헤파린으로 코팅된 8mL 튜브에 넣습니다.
메모: 적절한 항응고를 보장하기 위해 골수 흡인을 표본 튜브에 삽입한 직후 각 튜브를 뒤집습니다. 골수 응고는 종종 부적절한 물질의 원인입니다. 동일한 지점에서 추가 골수를 흡인할 수 있지만, 새로운 흡인을 취하기 전에 바늘을 5-10mm 전진시키는 것이 바람직합니다. 가급적이면 삽입 레벨당 2회 이상의 드로우를 수행하지 않는 것이 좋습니다. 튜브에 첫 번째, 두 번째 및/또는 연속 무승부를 나타내는 숫자가 증가하도록 표시하십시오. 가장 관련성이 높은 진단 분석을 위해 첫 번째 추첨을 사용하는 것이 일반적인 규칙입니다.
- 또는 삽입 위치에서 바늘을 집어넣고 원래 삽입 위치에서 몇 밀리미터 떨어진 골수강에 다시 삽입하고 절차를 반복합니다.
메모: 심각한 혈액 오염을 방지하기 위해 당길 때 1-2mL 이상 흡입하지 마십시오.
- 재료가 필요한 만큼 반복합니다. 특정 임상 연구 프로토콜에 대한 충분한 재료가 흡입되면 골수 바늘을 제거합니다.
메모: 느리거나 어려운 골수 흡인의 경우, 항응고제로 미리 세척된 주사기를 사용하는 것이 도움이 될 수 있습니다. 드라이 탭의 경우, 이 원고의 범위를 벗어난 트레핀 생검을 수행합니다.
2. 형태학적 검사를 위한 도말 준비
- 최적의 형태학적 평가를 위해 시계 유리의 흡인에서 스피큘을 골라내고(예: 플라스틱 주걱 사용) 유리 슬라이드에 놓습니다.
- 골수가 있는 슬라이드 위로 다른 유리 슬라이드를 부드럽게 놓고 부드럽게 미끄러집니다. 압력을 피하십시오.
메모: 골수 스피큘이 매우 큰 경우에만 세포 확산의 두께를 줄이기 위해 약간의 압력을 가할 수 있습니다. 이 절차는 시편 튜브를 다룰 수 있는 보조자의 도움을 받을 수 있습니다. 환자 번호와 순차적 골수 채취 횟수가 포함된 튜브의 정확한 라벨링이 중요합니다.
- 슬라이드를 완전히 건조시킨 다음 May Giemsa Grünwald 염색을 수행합니다(재료 표 참조). 광학 현미경으로 형태학을 검사합니다(그림 1 참조).
참고: 그림 1A는 다양한 기능 세포 유형으로 구성된 건강한 골수의 도말을, 그림 1B는 주로 백혈병 세포를 동반한 AML 환자를 보여줍니다. 잔류 백혈병 부담을 더 잘 정의하려면 면역표현형을 수행해야 합니다.
