출처: Huber, AR, et al. 인간 혈액의 돌연변이 부하 및 클론 구성 특성화. J. Vis. 특급 (2019).
이 동영상은 골수에서 HSPC를 분리하고 단일 정렬된 HSPC를 얻는 방법인 형광 활성화 세포 분류 기술을 사용하여 HSPC를 분류하는 프로토콜에 대해 설명합니다. 이렇게 분류된 세포를 배양하여 HSPC 클론을 얻습니다.
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방법 논문
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2023년 4월 30일
출처: Huber, AR, et al. 인간 혈액의 돌연변이 부하 및 클론 구성 특성화. J. Vis. 특급 (2019).
이 동영상은 골수에서 HSPC를 분리하고 단일 정렬된 HSPC를 얻는 방법인 형광 활성화 세포 분류 기술을 사용하여 HSPC를 분류하는 프로토콜에 대해 설명합니다. 이렇게 분류된 세포를 배양하여 HSPC 클론을 얻습니다.
1. HSPC 격리, 정렬 및 문화권
| 항체 | 부피 [μL] |
| BV421-CD34 | 5 |
| FITC-리니지 믹스 (CD3/14/19/20/56) | 5 |
| PE-CD38 | 2 |
| APC-CD90 | 0.5 |
| 퍼CP/Cy5.5 - CD45RA | 5 |
| PE/Cy7- CD49f | 1 |
| 핏씨 -CD16 | 1 |
| FITC-CD11 | 5 |
| FACS 버퍼 | 25.5 |
표 1: HSC 분류 혼합.HSC를 분류하는 데 사용되는 항체의 희석액을 나타내는 표가 나와 있습니다.
2. HSPC 클론 수집
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그림 1: 입력 자료를 기반으로 한 실험 절차를 보여주는 순서도. 이 그림의 더 큰 버전을 보려면 여기를 클릭하십시오.

그림 2: 세포 분류 전략.첫째, 게이팅은 작은 단핵 세포에서 수행됩니다. 둘째, 단일 셀은 선형 분수의 선택에 의해 게이트됩니다. 계통 음성 세포는 게이트가 있습니다. 모...
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| 이름 | 회사 | 카탈로그 번호 | 댓글 |
|---|---|---|---|
| CD11c 핏씨 | 바이오레전드 | 301603 | 클론 3.9 |
| CD16 핏씨 | 바이오레전드 | 302005 | 클론 3G8 |
| CD3 BV650 | 바이오레전드 | 300467 | 클론 UCHT1 |
| CD34 BV421 | 바이오레전드 | 343609 | 561 |
| CD38 PE | 바이오레전드 | 303505 | 클론 HIT2 |
| CD45RA 퍼CP/싸이5.5 | 바이오레전드 | 304121 | 클론 HI100 |
| CD49f PE/싸이7 | 바이오레전드 | 313621 | 클론 GoH3 |
| CD90 에이피 | 바이오레전드 | 328113 | 클론 5E10 |
| Cell Strainer 5 mL 튜브 | 코 닝 | 352235 | |
| CELLSTAR 플레이트, 384w, 130 μL, F-bottom, TC, 커버 | 그라이너 | 781182 | |
| Human Flt3-Ligand, 프리미엄급 | 밀테니 바이오텍 | Tel.: 130-096-479 | PBS 내 0.1% BSA에서 100μg/mL로 일회용 부분 표본(25μL)에 재반응 |
| 인간 재조합 IL-3 (E. coli 발현) | 줄기세포 기술 | 78040.1 | PBS의 0.1% BSA에서 100μg/mL로 일회용 부분 표본(2.5μL)에서 재조정 |
| 인간 재조합 IL-6 (E. coliexpressed) | 줄기세포 기술 | 78050.1 | PBS의 0.1% BSA에서 100μg/mL로 일회용 부분 표본(5μL)에서 재조정 |
| Human SCF, 프리미엄급 | 밀테니 바이오텍 | Tel.: 130-096-695 | PBS 내 0.1% BSA에서 100μg/mL로 일회용 부분 표본(25μL)에 재반응 |
| 인간 TPO, 프리미엄급 | 밀테니 바이오텍 | Tel.: 130-095-752 | PBS의 0.1% BSA에서 100μg/mL로 일회용 부분 표본(12.5μL)에서 재조정 |
| 계보 (CD3/14/19/20/56) FITC | 바이오레전드 | 348701 | 클론: UCHT1, HCD14, HIB19, 2H7, HCD56 |
| PBS (PBS) | 연구소 시설에서 제조되었습니다. 상업적으로 이용 가능한 PBS도 사용할 수 있습니다 | ||
| 프리모신 | 인비보젠 | 개미-PM-1 | 항생제 제형 |