Side Population Assay: 제브라피시에서 종양 세포의 Side Population을 분리하는 방법

초록

출처: Pruitt, M. M., et al. 제브라피시에서 Myc-induced T-cell Acute Lymphoblastic Leukemia in the Side Population. J. Vis. 특급 (2017).

다음 프로토콜은 줄기세포로 구성된 T-세포 급성 림프구 백혈병(T-ALL) 종양 세포의 측면 집단을 성체 제브라피시에서 분리하는 방법을 설명합니다. 측면 모집단에는 눈에 띄는 세포 마커가 없기 때문에 Hoechst 33342 염료 유출 분석을 사용하여 분리합니다.

프로토콜

1. 형광 표지된 T-ALL 세포를 Hoechst 33342로 염색하여 측면 집단 식별

1. Hoechst 33342 1:10을 뉴클레아제가 없는 H₂O로 희석하여 1 mg/mL 작업 농도를 만듭니다. 염료는 4 °C와 어두운 곳에 보관하십시오.
2. 디메틸 설폭사이드(DMSO) 1mL에 49.1mg을 용해시켜 베라파밀 100mM 용액을 준비합니다.
   메모: 베라파밀은 ABC 수송체의 억제제이며 측면 개체군 실험을 위한 중요한 대조군입니다. 샘플에 베라파밀을 첨가하면 ABC 수송체가 Hoechst 33342 염료를 유출하는 능력이 억제됩니다. 따라서 실제 측 모집단은 베라파밀이 샘플에 추가될 때 사라집니다.
3. 수조를 28°C로 설정합니다.
4. 형광 활성화 세포 분류기(FACS) 튜브에 세포와 용액을 추가하여 어둠 속에서 샘플과 대조군을 준비합니다.
   1. FACS 튜브에 10개의⁶ 세포, 15μL의 1mg/mL Hoechst 33342 및 2.5μL의 DMSO를 추가하여 샘플을 준비합니다. FBS/PBS를 사용하여 부피를 1mL로 조정합니다.
   2. FACS 튜브에^{10개의 6} 세포, 15μL의 1mg/mL H....

재료

이 논문에 사용된 재료 목록

이름	회사	카탈로그 번호	댓글
소 태아 혈청(FBS)	하이클론 연구소, Inc.	피셔 사이언티픽 - SH3007103	500 밀리리터
인산염 완충 식염수(PBS)	Life Technologies의 Gibco	1001-023	pH 7.4 (1x) - 500 mL
회스트: 33342	생명 기술	H3570	10 밀리리터
베라파밀	시그마 생명과학	V4629	1 지
디메틸설폭사이드(DMSO)	시그마 생명과학	D8418	100 밀리리터
프로피듐 요오드화물	생명 기술	P3566	10 밀리리터
FACSAria Fusion 세포 분류기	BD 바이오사이언스

년 (영문)