췌장 세포의 칼슘 역학 이미징: 췌장 섬의 세포질 칼슘 농도의 실시간 변화를 연구하는 기술

초록

출처: Hamilton, A., et. al. 마우스 췌장섬 세포의 하위 집단에서 칼슘 역학 이미징. J. Vis. 특급 (2019).

이 비디오는 췌장섬 세포의 작은 하위 집단에서 세포질 칼슘 농도의 변화를 연구하기 위해 섬 세포를 실시간으로 이미징하는 기술을 설명합니다. 소세포 하위집단은 아드레날린(adrenaline) 및 그렐린(ghrelin)과 같은 마커 화합물에 대한 기능적 반응을 사용하여 확인할 수 있으며, 이는 섬세포의 특정 집단에서 세포질 칼슘의 변화를 유도합니다. 이것은 혈당과 섬 분비 출력 사이의 교차 담화에 대한 통찰력을 제공할 수 있습니다.

프로토콜

1. 염료를 적재하거나 센서를 표현합니다.

1. 덫 가능한 염료를 준비합니다.
   1. 포획 가능한 염료(예: Fluo-4)의 부분 표본(일반적으로 50μg)을 DMSO에 2mM의 스톡 농도로 용해합니다. 플루론산을 최종 농도 1%(DMSO의 20% 스톡 사용)에 첨가하여 염료의 용해를 개선합니다.
   2. 염료를 작은 PCR 튜브(각각 2μL)에 분취합니다. 염료는 몇 주 동안 냉동 (-20 °C)으로 보관할 수 있습니다.
2. 또는 재조합 센서를 준비합니다.
   1. 센서(예: GCaMP6f를 인코딩하는 아데노바이러스 벡터)를 10 μL 분취량으로 분배하고 -80 °C에서 보관합니다.
   2. (선택 사항) 여러 연속 희석액을 사용하여 섬(아래 참조)을 감염시켜 바이러스 스톡의 역가를 사전 테스트하여 감염에 대한 최적의 농도를 밝힙니다.
      메모: 다른 벡터(렌티바이러스, BacMam, AAV)로 인코딩된 재조합 센서에는 다른 감염 프로토콜이 필요합니다. 벡터 공급자에게 이를 확인하고 필요에 맞게 작업 비율을 최적화하십시오. 아데노바이러스의 "작동" 재고는 -20°C에서 보관할 수 있으며 여러 번 동결/해동할 수 있습니다. 과도한 동결-해동 주기는 ....

재료

이 논문에 사용된 재료 목록

이름	회사	카탈로그 번호	댓글
40x/1.3 대물렌즈
GCaMP6f, (인간 유형 5) 아데노바이러스 벡터	벡터 바이오랩	1910
소 태아 세럼	시그마-알드리치	F7524-500ML
RPMI 배지	써모 피셔(Thermo Fisher, GibCo, Life Technologies)	61870044
페니실린/스트렙토마이신	써모 피셔(Thermo Fisher, GibCo, Life Technologies)	15140122
Axiovert 200 현미경
플루오4	Thermo Fisher(생명 기술)	F14201

년