콜라겐분해효소 관류를 통한 췌장섬 분리: 췌장섬 세포를 분리하는 효소 방법

초록

출처: Villarreal D. et al. 마우스로부터 췌장섬 격리를 위한 간단한 고효율 프로토콜. J. Vis. 특급 (2019년)

랑게르한스 섬이라고도 불리는 췌장 섬은 포도당 조절 및 기타 중요한 생물학적 기능을 위한 호르몬을 생산하는 내분비 세포의 클러스터입니다. 이 프로토콜은 먼저 Vater의 Ampulla를 통해 콜라겐 분해 효소를 관류하여 외분비 췌장 조직을 소화하고 단순화 된 밀도 구배 원심 분리를 통해 췌장 섬을 분리하는 방법을 설명합니다.

프로토콜

동물 모델과 관련된 모든 절차는 지역 기관 동물 관리 위원회와 JoVE 수의학 검토 위원회에서 검토되었습니다.

필요한 수술 도구는 그림 1에 나와 있고 절차의 개략도는 그림 2에 나와 있습니다.

1. 솔루션

1. 증류수 900mL에 10X HBSS(재고) 100mL를 추가하여 1L HBSS(1X)를 만들어 Hank's Balanced Salt Solution(HBSS)을 준비합니다.
2. 얼음처럼 차가운 1X HBSS 450mL에 100X 소 태아 혈청(FBS) 50mL를 첨가하여 STOP 용액을 준비합니다(신선하게 만들어야 하며 1시간 이내에 사용해야 함). 이렇게 하면 500mL STOP 용액이 됩니다. STOP 용액을 4°C로 유지하십시오.
3. 얼음처럼 차가운 1X HBSS에 콜라겐 분해 효소 P 1 mg/mL를 첨가하여 콜라겐 분해 효소 P 용액(사용 후 1시간 이내에 신선하게 만들어야 함)을 준비합니다. 6 mL/마우스를 사용합니다.
   1. 콜라겐분해효소 P 용액에 0.05%(w/v) 소 혈청 알부민(BSA)을 추가합니다(이는 고립된 섬에 영양분을 제공합....

결과

그림 1: 수술 도구.
곡선형 수술용 가위, 커버 유리 집게, 마이크로 Adson 집게, 곡선 집게, 소형 수술용 가위 및 Schwartz 마이크로 세레핀(미세 혈관 클램프)이 표시됩니다. 이 그림의 더 큰 버전을 보려면 여기를 클릭하십시오.

재료

이 논문에 사용된 재료 목록

이름	회사	카탈로그 번호	댓글
3 mL 주사기	BD (영어)	309657	콜라겐분해효소 P 보유
커버글라스 겸자	폭스바겐	82027-396	절개 절차를 돕기 위해 마우스의 피부를 잡는 것
곡선형 집게	시그마-알드리치	Z168696	췌장 제거 중 조직 유지
100mm 페트리 접시	폭스바겐	2041년 30월 30	섬 양식에 사용됨
30 G. 1/2 인치 바늘	BD (영어)	305106	콜라겐 분해 효소 P를 전달하기 위해 vater의 Ampulla의 침투를 위해 -이 게이지는 대부분의 CBD에 잘 맞기 때문에 사용됩니다
50ml 튜브	폭스바겐	89039-658	소화된 췌장 조직, 콜라겐 분해 효소 P 및 정제된 섬을 보유
방수 흡수 패드 수분 장벽	폭스바겐	82020-845	수술 과정에서 혈액을 흡수하기 위해
스윙 이 있는 원심분리기 5810R 버킷 및 감속 기능	에펜도르프	5811FJ478114	펠릿 조직을 위한 사용, 펠릿은 원뿔 관의 바닥에 형성됩니다 - 그네 물통 분리기는 필요합니다. 또한 선언 기능은 그라디언트 레이어를 형성하는 데 중요합니다
콜라겐 분해 효소 P-1g	로슈진단	11249002001	외분비 췌장의 소화를 위해
곡선 형 수술 용 가위	피셔-사이언티픽	Tel.: 13-804-21	열린 마우스 복부 절단용
해부 현미경	올림푸스	사이즈16	주요 해부학적 구조를 정확하게 식별하는 데 사용됩니다 콜라겐분해효소를 췌장으로 전달합니다.
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RPMI-1640 미디어(L-글루타민 제외	코 닝	15-040-이력서	작은 섬 문화
Schwartz micro serrefines (미세혈관 클램프)	정밀 과학 도구	18052-01	클램핑 총담관 및 간 동맥
흔들리는 수조	보켈/그랜트	8R0534008	외분비 조직의 기계적 소화에 중요
작은 수술용 가위	폭스바겐	82027-578	췌장에 부착된 조직 절단
RNaseZap	피셔-사이언티픽	AM9780	RNase 제거용
이소플루란	피라말	B13B16A	수술 전 생쥐를 마취하기 위해

일 년 ) 년