형광 정교성 마우스 모델: 생체 내 종양 진행을 평가하기 위해 암세포를 발현하는 GFP를 마우스에 이식

초록

출처: Moreno, J. A., et al. 췌장암의 형광 정소외 마우스 모델. J. Vis. 특급(2016)

이 비디오는 녹색 형광 단백질 발현 췌장암 세포를 마우스의 췌장에 이식하는 프로토콜을 보여줍니다. 정소성 마우스 모델은 원발성 및 전이성 종양에 대한 새로운 치료법의 효능을 조사하는 데 도움이 됩니다.

프로토콜

동물 모델과 관련된 모든 절차는 지역 기관 동물 관리 위원회와 jove 수의학 검토 위원회에서 검토되었습니다.

1. 외과적 임플란트

참고: 모든 수술 재료와 기구가 멸균되었는지 확인하십시오. 항상 무균 기술을 연습하십시오.

1. 테이블 위에 발열 패드를 놓고 멸균 드레이프로 덮습니다. 마취 기계를 설치하고 모든 용품이 팔이 닿는 곳에 있는지 확인하십시오.
2. 동물의 주둥이를 마취 마스크에 넣고 마취를 1L/min의 산소와 2.5% 이소플루란으로 설정합니다.
3. 요오드로 동물의 옆구리를 부드럽게 문지르고 70 % 에탄올로 헹굽니다. 세 번 반복합니다.
4. 뒷발을 꼬집어 동물이 완전히 마취되었는지 확인합니다. 동물은 완전히 마취되었으며 반응이 관찰되지 않으면 수술할 준비가 되었습니다. 그러나 동물이 움찔하면 기화기에 충분한 마취가 있는지 확인하고 동물이 완전히 마취될 때까지 더 많은 시간을 허용하십시오.
5. 약 200μl의 세포 현탁액을 18G 니들(이전에 냉각됨)을 사용하여 1.0ml TB 주사기에 로드합니다. 바늘을 27G 바늘로 교체하고 사용할 준비가 될 때까지 얼음에 다시 넣습니다.
6. 비장의 일반적인 영역(복부의 왼쪽 위쪽 사분면)을 찾고 집게를 사용하여 해당 영역 상단의 피부를 꼬집습니다. 수술용 가위를 사용하여 약 1.0cm를 절개하여 주머니를 만듭니다. 마찬가지로, 비장 위쪽의 평활근을 꼬집고 복막강에 접근하기 위해 잘라냅니다.
7. 비장의 꼬리 끝을 부드럽게 잡고 몸에서 빼냅니다. 췌장은 비장에 붙어있을 것입니다. 젖은 멸균 Q-tip을 사용하여 췌장을 벌리고 췌장의 꼬리를 찾습니다.
8. 췌장 꼬리에 50μl 주사를 전달하고 바늘을 10초 동안 내부에 두었다가 췌장에서 바늘을 천천히 회전시킵니다. 성공적인 이식은 누출이 없는 표면 거품처럼 보일 것입니다.
9. 췌장과 비장을 복막강으로 되돌립니다. 먼저 근육을 둘러싼 다음 피부를 따로 둘러쌉니다. 6-0 봉합사 또는 스테이플을 사용하여 절개 부위를 봉합합니다. 동물의 통증을 피하기 위해 24시간 동안 케토프로펜을 피하(SC)(5mg/kg)로 투여하십시오. 또는 36시간 동안 12시간마다 부프레노르핀 sc(0.05 - 0.1mg/kg)를 투여합니다.
10. 마취에서 동물을 회복하고 우리로 되돌려 놓습니다. 또한 통증을 모니터링하십시오. 동물은 수술 당시(또는 심지어 선제적) 수술 시에 통증 완화제를 제공받아야 합니다. IACCUC 프로토콜에 따라 또는 담당 수의사 또는 피지명자의 처방에 따라 통증을 경험하는 동물에게 추가 통증 완화를 제공해야 합니다.

재료

이 논문에 사용된 재료 목록

이름	회사	카탈로그 번호	댓글
Alcare 또는 거품이 인 방부제 Handrub	스테리스	639680
TB 주사기 27 G 1/2	벡턴 디킨슨(Becton Dickinson)	제305620
이소플루란	블루틀러 샤인	50562
케토프로펜	포트 닷지 동물 건강
수술용 가위, 5.5인치 스트레이트 마요네즈	헨리 샤인	22-1600
PANC-1 GFP 세포주	항암, Inc
소형 동물 이미징 시스템: iBox Scientia	UVP, LLC. 캘리포니아주 업랜드.		살아있는 동물의 형광 종양을 관찰하기 위한 소동물 이미징 시스템
봉합사벳 PGA 6-0 PGA	헨리 샤인	39010
PANC-1 GFP 세포주	항암, Inc
DPBS(Dubelcco의 인산염완충 식염수)	써모 피처 Sci	21300025

호 년 년