대장암의 PDOX 마우스 모델 생성: 쥐 모델에서 대장암의 진행 연구

초록

출처: Moret, R. et al. 인간 요로상피 세포 암종 및 결장직장암 종양 성장 및 자연 전이에 대한 환자 유래 정형소 이종 이식 모델. J. Vis. 특급 (2019).

이 비디오는 비만이 아닌 당뇨병/중증 복합 면역결핍증(NOD/SCID) 마우스에서 결장직장암 세포의 진행을 연구하기 위해 환자 유래 정형외과 이종이식 결장직장암 마우스 모델을 생성하는 프로토콜을 설명합니다. 이 쥐 모델은 원발성 종양 성장 및 전이 패턴을 이해하는 데 도움이 됩니다.

프로토콜

동물과 관련된 모든 절차는 지역 기관 동물 관리 위원회와 JoVE 수의학 검토 위원회에서 검토되었습니다.

1. 세포주 배양

1. 5% CO₂ 가습 인큐베이터에서 37°C에서 10% 소 태아 혈청, 2nM 글루타민, 100U/mL 페니실린 G 및 100mg/mL 스트렙토마이신이 보충된 완전한 RPMI-1640 배지에서 HK 세포를 성장시킵니다.
   메모: HK 세포는 정상적인 인간 여포 수지상 세포이며 in vitro에서 ≤ 15 계대까지 성장 및 확장될 수 있습니다.

2. 루시페라아제 라벨링된 종양의 태깅 및 농축

1. 6-8주 된 암컷 NOD/SCID 마우스의 왼쪽 및 오른쪽 측면에 종양을 직접 이식합니다.
2. 디지털 캘리퍼를 사용하여 격주로 종양 성장을 측정합니다.
3. 직경 1cm에서 종양을 형질주입합니다. 27G 바늘이 있는 1cc 주사기를 사용하여 Luc/적색 형광 단백질(RFP)-렌티바이러스(50μL/종양, 농축된 고역가 렌티바이러스 스톡에서 1:30 희석)를 종양에 직접 주입합니다.
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재료

이 논문에 사용된 재료 목록

이름	회사	카탈로그 번호	댓글
RPMI-1640 미디엄	아메리칸 타입 컬처 컬렉션	110636
이소플루란	Henry Schein 동물 건강	108333
D-루시페린(150mg/kg)	퍼킨 엘머	122796
글루타민 (2 nM)	피셔 사이언티픽	35050061
Luc/RFP-렌티바이러스	공동 작업자로부터. 참고 문헌 13 참조: Gills, J. et al. 방광 종양 이식, 성장, 혈관 신생 및 전이의 인간 고급 요로 상피 세포 암종을 가능하게 하는 환자 유래 orthotopic 이종 이식 모델. 종양 표적. 9, 32718-32729, doi:10.18632/ oncotarget.26024 (2018).
페니실린/스트렙토마이신 100mL(100U/mL)	피셔 사이언티픽	15140-122
기체
100% 산소	에어가스 Inc	황소 USP200
100% 이산화탄소2	에어가스 Inc	CD USPE
마우스
6-8주 된 NOD/SCID 마우스(암컷)	잭슨 랩	1303
도구
15mL 원뿔형 튜브	사르슈테트	11799
150mm 조직 배양 접시	미국 사이언티픽 Inc	CC7682-3614
집게	대칭 외과 Inc	06-0011
수술용 가위	대칭 외과 Inc	2011년 02
설비
5% CO2 가습 인큐베이터	써모 사이언티픽(Thermo Scientific	3110
생물 발광(BLI) 이미징 기계	퍼킨 엘머	CLS136334
BLI 이미징 기계 소프트웨어	퍼킨 엘머	CLS136335
디지털 캘리퍼스	Fowler 도구 및 기기	54-115-330
해부 현미경	정밀 기기 LLC	(504) 228-0076
Isoflurane 유도 챔버	퍼킨 엘머	119038

년 년 년 월 ) 년