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방법 논문
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2023년 4월 30일
출처: Okazawa Y. et al., High-sensitivity Detection of Micrometastases Generated by GFP Lentivirus-transducted Organoids Cultured from a Patient-derived Colon Tumor. J. Vis. 특급. (2018).
이 동영상은 형광 이미징을 가능하게 하기 위해 GFP 렌티바이러스 입자에 의해 형질전환된 CRC 오가노이드를 생성하는 기술에 대해 설명합니다. 이러한 GFP 표지 오가노이드는 동물 모델에 배치될 때 종양 침입 및 전이를 연구하는 데 도움이 됩니다.
1. 인공 세포외 기질에서 배양된 CRC 오가노이드 생성
결장 PDX의 CRC 오가노이드 배양에 대한 실험 절차는 그림 1B(4단계)에 요약되어 있습니다.
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그림 1: NOG 마우스에서 GFP 렌티바이러스로 표지된 PDX 유래 CRC 오가노이드에 의한 전이 발생의 개략도. (A) CRC 조직의 작은 조각을 NOG 마우스에 피하 이식(1단계). 환자로부터 외과적으로 절개한 CRC 조직을 조각으로 절단하여 NOG 마우스에 피하 이식했습니다. S.C.: 피하 이식.(B) PDX에서 해리된 CRC 오가노이드 생성(2-4단계). 개발된 CRC 이종이식편을 다지고(2단계) 콜라겐분해효소를 포함한 배양 배지를 함유한 15mL 튜브로 옮겼습니다(3단계). 느린 교반으로 배양한 후, CRC 세포 현탁액을 여과하였다(단계 3). 그런 다음, CRC 오가노이드 배지의 오가노이드 세포 현탁액을 인공 세포외.......
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| 이름 | 회사 | 카탈로그 번호 | 댓글 |
|---|---|---|---|
| 12웰 플레이트 | BMBio | #92412 | |
| 마이크로튜브 | 에펜도르프 | #0030120086 | 사용 전 오토클레이브 |
| 혈구계 | Erma | #03-202-1 | |
| Matrigel 기저막 매트릭스 | 코닝 | #354234 | -20°C에서 저장하십시오. 사용할 때까지 얼음 위에 올려 놓으십시오. |
| 콜라겐 분해 효소 유형 1 | 시그마 | #C1030 | 150 mg/ml 콜라겐 분해 효소 1 in 1× PBS입니다. 부분 표본을 -20°C에 저장하십시오. C 최대 1년 |
| DMEM/F-12 with GlutaMAX™ | 깁코 | #10565018 | |
| 페니실린 | Gibco | #15140122 | 4°C에 보관. 1개월 이내 사용 |
| hEGF | 페프로텍 | #AF-100-15 | -20°C에서 보관하십시오. ROCK 억제제인 |
| Y27632를 사용하는 것과 같은 날에 배지에 추가합니다. | 와코 | #253-00591 | -20°C에 보관. 사용 당일에 매체에 추가 |
| 스트렙토마이신 | Gibco | #15140122 | 4°C에 보관. 1개월 이내 사용 |
| 1% 또는 5% FCS | DMEM/F-12 with GlutaMAX™ 보충제 (Gibco # 10565018) 1 % 또는 5 % FCS, 100 U / ml 페니실린, 100 µ g/ml 스트렙토마이신, 2 ng/ml hEGF 및 10 &마이크로; M Y27632, ROCK 억제제. 4°C에 보관하십시오. 1개월 이내에 사용하십시오. | ||
| PRRL-GFP 벡터 | 로버트 A. 와인버그 박사의 선물 | ||
| FuGENE 6 transfection regent | 로슈 | 11814 443001 | |
| pCMV-VSV-G | 로버트 A. 와인버그 박사의 선물 | ||
| pCMV-dR8.2 dvpr | 로버트 A. 와인버그(Robert A. Weinberg) 박사의 선물 | ||
| Zeiss Axioplan 2 실체 형광 현미경 | 자이스 |
