쥐 회장 절제 모델: 쥐 모델에서 회장절제술로 인한 담즙 대사 연구

초록

출처: Zhang, R., et al. 쥐 장에서 ileectomy-induced bile overaccumulation in mouse intestine. J. Vis. 특급 (2017년)

이 비디오는 쥐 모델에서 장 절제에 대한 자세한 프로토콜을 설명합니다. 이 기술은 쥐 장에서 회장절제술로 인한 담즙 흡수 장애, 과다 축적 및 독성에 대한 통찰력을 제공합니다.

프로토콜

1. 회장 절제술 및 문합

1. 작은 동물 배양실에서 isoflurane(2 - 3%)으로 마우스를 마취합니다. 동물이 이소플루란을 사용하는 동안 발가락 꼬집음 기술을 사용하여 적절한 마취를 결정합니다.
2. 제모 제품을 바르고 복부의 털을 제거하고 마취 상태를 유지하면서 수술용 스펀지를 사용하여 머리카락을 닦아냅니다. 체온을 조절하는 작은 동물 수술대(그림 1A)에 마우스를 올려 체온을 37°C로 유지합니다. 안면 마스크를 통해 이소플루란(1 - 2%)으로 마취를 유지합니다. 안구 연고로 쥐의 눈을 치료하십시오.
3. 포비돈 요오드와 70% 알코올을 사용하여 피부를 세척하고 멸균 수술 거즈로 복부 수술 부위를 덮습니다(그림 1B).
4. 마취가 시행되면 외과용 메스를 사용하여 복부 정중선을 절개합니다. 솜 끝이 있는 애플리케이터를 사용하여 장을 보호하고 견인기로 마우스의 복부 근육을 당겨 복강을 완전히 열고 노출시킵니다(그림 1C).
5. 맹장을 찾습니다. 맹장에서 시작하여 연결된 회장과 제주넘의 일부를 복강 밖으로 조심스럽게 옮깁니다(그림 1D).
   메모: 맹장은 단식 후에도 크기가 크기 때문에 쉽게 식별할 수 있습니다.
6. 상장간막동맥의 상부 가지를 7-0 실크 봉합사로 결찰하여 절제할 회장 분절에 공급되는 혈액을 막습니다. 회장색은 결찰 후 분홍색에서 짙은 자주색으로 변합니다. (그림 1E - F).
7. 실험 목적에 따라 가위를 사용하여 회장의 50% 또는 90%를 절제하고 제거합니다.
   메모: 가짜 수술의 경우, 상장간막 동맥 결찰술을 시행하지 말고 회장을 제거하지 마십시오.
8. 양쪽 회장 말단의 내강을 0.9% 식염수로 플러시합니다.
   메모: 남아 있는 온전한 회장은 여전히 상장간막 동맥으로부터 정상적인 혈액 공급을 받고 있기 때문에, 이 과정에서 소량의 혈액이 씻겨 나갑니다. 이는 또한 회장 말단으로의 혈액 공급이 정상이며 문합 절차 중 허혈이 없음을 나타냅니다(그림 1G).
9. 양쪽 회장 말단의 쪽에서 장간막을 찾습니다. 장간막을 정렬하고 회장 말단을 8-0을 사용하여 함께 봉합합니다. 봉합사(그림 1G - H).
10. 회장의 반대쪽 면을 봉합하여 회장이 자연스러운 방식으로 문합된 상태를 유지합니다(그림 1I).
11. 두 개의 원래 봉합사 사이의 위쪽과 아래쪽을 봉합하여 두 회장 말단을 완전히 결합합니다(그림 1J).
12. 3단계 봉합 절차를 완료한 후 문합 부위에서 누출이 없는지 확인합니다(그림 1G-I). 맹장과 소장을 복강 안으로 원래의 해부학적 위치로 되돌립니다. 뭉툭한 바늘을 사용하여 따뜻한 0.9% 식염수로 수술 부위를 씻습니다. (그림 1K).
13. 복부 근육층의 절개 부위를 6-0 봉합사로 봉합합니다. 최적의 상처 치유를 촉진하기 위해 집게를 사용하여 복부 절개 부위를 정렬하고 복부 피부를 봉합합니다(그림 1L).

2. 수술 후 관리

1. 회복을 위해 수술 후 마우스를 중환자실로 옮깁니다. 온도 조절이 가능한 발열 패드가 있는 종이 깔개 케이지에 보관하여 밤새 수술 후 회복을 계속합니다. 생쥐에게 일반 음식과 물 외에 부드러운 음식을 공급하십시오.
2. 진통제를 위해 8-12시간마다 피하 주사로 부프레노르핀(0.05 - 0.1 mg/kg)을 투여합니다.
   메모: 심하게 아픈 경우 CO₂로 마우스를 안락사시킵니다.
3. 최종 지점에서 과량 투여된 이소플루란을 사용하여 마우스를 희생하고 필요에 따라 샘플을 수확합니다(섹션 3).

3. 회장절제술로 인한 담즙 과다 축적 평가

1. 회장의 0%(가짜), 50% 또는 90%를 절제한 후 하루 후에 마우스를 계량하고 해부합니다.
2. 위장관을 제거하고 무게를 잰다. GI 체중 대 체중 비율을 계산하여 담즙염 흡수 장애 및 과다 축적의 심각성을 평가합니다.
3. 위장관을 15mL 원뿔형 튜브로 옮기고 가위를 사용하여 짧은 세그먼트로 자릅니다. 절단 후 3,000 x g에서 10분 동안 원심분리합니다. 상등액(담즙산을 함유한 위장관액)을 깨끗한 튜브에 옮깁니다.
4. 위장관액의 총 부피와 무게를 측정하고 유체 중량 대 위장관 중량 비율을 계산하여 위장관의 담즙 과다 축적을 추가로 평가합니다.
5. 담즙산 분석법으로 상등액의 총 담즙 양을 측정합니다.

결과

그림 1: 회장절제술의 수술 절차. (A) 체온이 조절되는 소동물 수술대를 이용하여 체온을 유지한다. (B) 복부 피부 준비 후 멸균 거즈로 수술 부위를 덮습니다. (C) 복부 정중선 절개를 통해 소장을 노출시킨다. (D) Cecum(흰색 점선으로 강조 표시됨)은 회장을 찾기 위해 표시됩니다. 회장(노란색 점선)과 상장간막 동맥 가지(노란색 화살표)를 노출시킵니다. (E) 회장에 혈액을 공급하는 상장간막동맥(superior mesenteric artery)의 가지를 결찰한다. 결찰 부위는 노란색 화살표로 표시됩니다. 회장색은 동맥 결찰에 따라 짙은 자주색 또는 검은색으로 변합니다. 허혈성 세그먼트는 노란색 점선으로 강조 표시됩니다. (F) 점선은 허혈성 회장과 정상적으로 관류된 회장의 경계를 나타냅...

재료

이 논문에 사용된 재료 목록

이름	회사	카탈로그 번호	댓글
C57BL/6J	잭슨 연구소
해부 현미경	올림푸스	SZ61	수술용
동물성 온도 조절기	Physitemp 악기, Inc	TCAT-2LV	체온 조절용
이소플루란 마취제 기화기	베트핍	911104	마취용
해부 겸자	파인 사이언스 도구, Inc.	11274-20	수술용
가위	파인 사이언스 도구, Inc	14084-08	수술용
바늘 홀더	Roboz 수술 기구 Co.	RS-7882	수술용
마이크로 나이프 바늘 칼날	피셔 사이언티픽	10318-14	수술용
6-0 모노필라멘트 봉합사	에티콘	1698지	복부 피부 폐쇄용
7-0 실크 봉합사	에티콘	766지	결찰의 경우
8-0 모노필라멘트 봉합사	에티콘	1714지	문합용
수술용 스펀지	Dynarex 주식 회사	3333	수술용
작은 면 팁 어플리케이터	피셔 사이언티픽	Tel.: 23-400-118	수술용
이소플루란	Piramal 헬스케어 리미티드	66794-013-25	마취용
부프레노르핀 염산염	레킷벤키저 제약	제12496-0757-1	진통제의 경우
0.9% 염화나트륨 주입	B. 브라운 메디컬 Inc.	TEL.0264-7800-10	세척/주입용
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