환자 유래 이종이식 모델링: 흑색종 마우스 모델을 생성하는 기술

초록

출처: Min Xiao et al. 흑색종 환자 유래 이종 이식 모델. J. Vis. 특급 (2018년)

이 비디오에서는 인간 유래 흑색종 세포를 면역이 저하된 마우스의 옆구리에 피하로 이식합니다. PDX 모델을 사용하면 생체 내 조건에서 관찰된 종양 이질성과 흑색종 공격성을 더 잘 요약할 수 있는 흑색종 세포의 전임상 조사를 수행할 수 있습니다.

프로토콜

동물 모델과 관련된 모든 절차는 지역 기관 동물 관리 위원회와 JoVE 수의학 검토 위원회에서 검토되었습니다.

1. 마우스 이식을 위한 종양 조직 처리

1. 외과적 절제 또는 외과적 생검 조직 처리
   1. 조직을 멸균된 페트리 접시에 옮기고 종양 조직을 주변의 정상 조직과 최대한 분리합니다.
   2. 남아 있는 종양에서 괴사 조직(일반적으로 종양 내 중앙에 위치한 창백한 조직으로 식별됨)을 가능한 한 많이 제거합니다.
   3. 메스를 사용하여 초기 종양 덩어리를 외과용 마우스 이식을 위해 거의 동일한 조각(~3mm x 3mm)으로 세분화합니다(그림 1).
   4. 선택적으로, 충분한 종양 조직을 사용할 수 있는 경우 다운스트림 분석(RNA 염기서열분석[RNASeq], 전체 엑솜 염기서열분석[WES] 등)을 위해 조직을 스냅-동결합니다.
   5. 두 개의 메스 날이 있는 십자 블레이드 기술을 사용하여 종양 조직을 다져 종양 슬러리를 만듭니다. 종양 덩어리를 가능한 한 곱게 다져 슬러리를 형성하면 이제 외과용 마우스 이식 준비가 되었습니다.
   6. 또는 종양 조직이 너무 단단하여 기계적 해리가 불가능한....

결과

그림 1: 대체 이식 방법.(A) 종양은 덩어리, 슬러리 현탁액 또는 단세포 현탁액으로 처리할 수 있습니다. (B) 세 가지 방법 모두 생체 내에서 종양의 성장을 허용합니다. 여기에 표시된 것은 종양을 피하로 이식하고 이식 후 12일 후에 이미지화한 마우스입니다. (C) 세 가지 이식 방법 중 하나를 주입한 마우스의 종양 성장 곡선을 보여줍니다. N = 팔당 5개; 오차 막대는 표준 오류입니다.

....

재료

이 논문에 사용된 재료 목록

이름	회사	카탈로그 번호	댓글
1M 헤페스	시그마-알드리치 코퍼레이션	고양이 # H0887-100ML
100x 펜스트렙	인비트로젠	고양이 # 15140163
HBSS-/- 1개(Ca++ 또는 Mg++ 제외)	클럽 메 드	고양이 # MT21-023-CV
2.5% 트립신	시그마-알드리치 코퍼레이션	고양이 # T4549-100ML	–20oC에서 10mL 부분 표본 보관
증권 시세	시그마-알드리치 코퍼레이션	고양이 # A9418-500G
클로르헥시딘	피셔 사이언티픽	고양이# 50-118-0313
콜라겐분해효소 IV (2,000 u/mL)	워 딩 턴	고양이 #4189	Collagenase IV 분말 스톡에서 HBSS - / - 메이크업 (Worthington # 4189, u / mg은 병에 표시되어 있으며 각 로트에 따라 다름); 동결 1
디엠소	시그마-알드리치 코퍼레이션	고양이 # C6295-50ML
DNase	시그마-알드리치 코퍼레이션	고양이 # D4527
EGTA (에틸렌 글리콜 비스 (2- 아미노 에틸 에테르) -N, N, N'N'- 테트라 아세트산)	머 크	고양이 # 324626.25
FBS(증권 시세	INVITROGEN 생명 기술	고양이 # 16000-044
곰팡이 구역	INVITROGEN 생명 기술	고양이 # 15290-018
겐타마이신	피셔 사이언티픽	고양이 # BW17518Z
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