1차 인간 각질세포의 유전자 변형: 재조합 레트로바이러스를 이용하여 각질세포를 유전적으로 조작하는 방법

초록

출처: Li, J. et al. 활력을 잃은 인간 진피를 이용한 유전자 변형 유기형 피부 배양 생성. J. Vis. 특급 (2015년)

이 비디오는 유전자 변형 1차 인간 각질 세포 재조합 레트로바이러스를 생산하기 위한 자세한 프로토콜을 설명합니다. 이 방법은 각질 세포에서 유전자 발현을 조작하는 데 사용할 수 있습니다.

프로토콜

인간 참가자와 관련된 모든 절차는 인간 복지를 위한 제도적, 국가적, 국제적 지침에 따라 수행되었으며 지역 기관 검토 위원회의 검토를 거쳤습니다.

1. 유전자 변형 일차 인간 각질 세포

참고: 완전한 DMEM 배지[DMEM + 10% 소 태아 혈청(FBS) + 펜/연쇄상구균]에서 성장한 양쪽 친화성 피닉스 세포를 사용하여 1차 인간 각질세포를 감염시키는 바이러스를 생성합니다. gag-pol 및 envelope와 같은 단백질을 암호화하는 바이러스 패키징 유전자는 피닉스 세포 게놈에 안정적으로 통합되어 레트로바이러스 벡터로 transfection될 때 바이러스 생성이 가능합니다. Phoenix 세포는 높은 효율로 transfection될 수 있어 높은 바이러스 역가 생산이 가능합니다. 이 포장 라인에서 생산된 바이러스는 인간을 포함한 다양한 포유류 세포를 감염시킬 수도 있습니다.

1. Day 1: transfection 전날, 완전한 DMEM 배지에서 well당 800,000개의 세포 밀도로 6-well plate에 phoenix 세포를 seed합니다.
2. 2일차: transfection이 있는 날에는 웰당....

재료

이 논문에 사용된 재료 목록

이름	회사	카탈로그 번호	댓글
양쪽 친화성 phoenix 세포주	증권 시세	CRL-3213
FUGENE 6 형질주입 시약	프로메가	E2691
각질세포 배지(KCSFM)	생명 기술	17005042
DMEM을 참조하십시오.	지브코	11995
인간 신생아 각질 세포	증권 시세	PCS-200-010
인간 신생아 각질 세포	세포 응용 분야	102케이-05엔
MSCV 레트로바이러스 벡터	클론텍	634401
LZRS 레트로바이러스 벡터	애드진
pSuper.Retro.Puro 레트로바이러스 벡터	올리고엔진	벡-PRT-0002
헥사디메트린 브로마이드	시그마	H9268-5G
FBS(증권 시세	지브코	10437-028
펜/스트렙	지브코	15140-122

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