최소 홍반성 선량 분석: 마우스 모델에서 UV 감도를 측정하는 방법

초록

출처: Amaro-Ortiz, A. et al. 인간화 마우스 모델에서 표피 멜라닌의 약리학적 유도 및 햇볕에 의한 보호. J. Vis. 특급 (2013년)

이 비디오는 인간의 피부를 모방한 마우스 모델인 인간화 마우스 모델에서 UV 감도를 측정하는 방법을 설명합니다. 우리는 피부에 홍반 또는 부종을 유발할 수 있는 UV 방사선의 최소 홍반량(MED)을 결정합니다. 이 방법은 자외선 민감성을 줄이는 데 사용되는 약물의 효능을 알아내는 데 도움이 될 수 있습니다.

프로토콜

동물과 관련된 모든 절차는 지역 기관 동물 관리 위원회와 JoVE 수의학 검토 위원회에서 검토되었습니다.

"최소 홍반성 선량"(MED) 계산에 의한 UV 감도 측정

1. 차량 또는 포스콜린으로 사전 처리된 동물을 사용하십시오. 케타민과 자일라진의 표준 혼합물을 복강내 주사하여 동물을 마취합니다.
2. MED 테스트를 위한 UV 폐색 테이프를 준비합니다. 테이프에 구멍을 만들려면 1cm² 원형 컷아웃이 있는 견고한 홀 펀치를 사용하십시오(그림 1A 및 B). 테이프에 정의된 크기의 구멍과 대칭 배열이 있으면 방사선 조사 후 피부 변화를 쉽게 인식할 수 있습니다. 테이프의 각 구멍 위에 작지만 쉽게 분리할 수 있는 테이프 조각을 붙여서 UV 노출 중 지정된 시간에 제거할 수 있어 다양한 UV 선량을 투여할 수 있습니다.
3. 동물이 충분히 진정되면 테이프를 등 표면에 놓습니다. 눈 윤활제는 항상 마취 상태에서 사용해야 합니다.
4. 최대 출력이 313nm이고 범위가 280-370nm인 두 개의 Westinghouse F15T8UV-B 램프로 구성된 UV 소스를 켭니다. l을 허용합니다amp UVB 센서가 있는 UV 광도계로 측정한 일정한 UV 출력과 평형을 이룹니다(일반적으로 l에 몇 분 소요amps가 예열됨).
5. UV 광도계로 측정한 UV 투과율을 기반으로 원하는 각 선량에 대한 UV 노출 시간을 계산합니다. 예를 들어, 램프의 UVB 출력은 2.4mW/^cm2를 측정합니다. 따라서 5kJ/m²를 투여하려면 아래 계산과 같이 피부에 208초(3분 28초)의 UVB 방사선에 노출되어야 합니다.
   
6. 진정된 동물(각각 폐색 테이프가 붙어 있음)을 복부 표면을 아래로 내려 자외선에 균일하게 노출되도록 합니다. 선택한 선량의 자외선을 투여하려면 구멍을 덮고 있는 작은 폐색 테이프를 순차적으로 제거하여^{피부 부위} 1cm2를 정확한 방사선량에 노출시킵니다. 따라서 위의 예를 사용하여 40kJ/^m2가 실험에서 가장 큰 선량인 경우 동물은 총 27분 47초 동안 램프 아래에 있고 40kJ/^m2 상태의 피부에는 전체 시간 동안 위에 테이프가 없습니다. 그러나 5kJ/^m2 조건 위에 있는 테이프는 노출에 208초가 남았을 때 제거됩니다. 테이프 제거 타이밍은 각 조건이 동시에 끝나도록 해야 합니다.
7. 자외선에 노출된 후에는 갑작스럽거나 과도하게 무리한 움직임으로 피부가 찢어지지 않도록 주의하면서 등 피부의 테이프를 조심스럽게 떼어냅니다. 마취에서 회복할 수 있도록 동물을 따뜻하고 조용한 장소에 두십시오.
8. 24-48시간 동안 마우스를 모니터링하여 특정 선량의 자외선 조사에 노출된 해부학적 부위에 해당하는 홍반(발적) 또는 부종(부기)의 눈에 띄지 않는 영역을 찾습니다. 피부 발견 사항을 사진으로 문서화합니다.
9. MED 값은 노출된 전체 피부 서클의 홍반 및/또는 부종에 의해 정의되는 염증을 유발하는 UV의 최소 선량에 해당합니다. 피부의 색소 침착은 MED의 결정에 어려움을 줄 수 있지만, 부분적으로 UV 노출 중 테이프의 정의된 구멍 모양 덕분에 홍반과 부종은 여전히 일반적으로 정확하게 평가할 수 있습니다.

결과

그림 1. 포스콜린에 의한 멜라닌화는 최소 홍반성 선량(MED) 테스트에 의해 결정된 바와 같이 UV 매개 염증으로부터 보호합니다. (A,B) UV 폐색 테이프의 위치와 동물의 UVB 복용량은 5일 동안 매일 두 번 (A, C) 또는 15일 동안 하루에 한 번 (B, D, E) 차량 또는 포스콜린으로 처리했습니다. 마지막 국소 치료는 방사선 조사 48시간 전에 적용되었습니다. 등쪽 피부는 1cm2의 원형 구멍이 뚫린 UV 폐색 테이프를 사용하여 다양한 용량의 UVB에 노출되었으며 적절한 선량을 산출하기 위해 다양한 노출 시간을 가졌습니다. 방사선 조사 후, 일부 실험에서는 노출된 피부의 원을 펜으로 표시했습니다. 특정 용량에 노출된 피부 전체의 홍반 및/또는 ...

재료

이 논문에 사용된 재료 목록

이름	회사	카탈로그 번호	댓글
자일라진	Anased 주입	LA04612	Shenandoah, 아이오와, 미국
케타민 HCl, USP	퍼트니	재질 보기 NDC 26637-411-01	세인트 조셉, 미주리, 미국
에탄올	데콘 랩.	2705
제모 크림, 나이르	교회 드와이트	JF-11 4381322	프라이스턴, 뉴저지
살균 Hg 램프 UV-B	웨스팅하우스	F15T8UV-B
복사계 광도계	국제 조명	1LT400A	피바디, 매사추세츠, 미국
이소테시아, 이소플루란, USP	버틀러 샤인(Butler Schein)	NCD 11695-6776-1	더블린, 오하이오, 미국
크로마미터	코니카 미놀타	CR-400	램지, 뉴저지, 미국
색도계 CR-400용 데이터 프로세서	코니카 미놀타	DR-400	램지, 뉴저지, 미국