이 문서에서는, 우리는 50 μm의 루멘과 유리 모세관 바늘을하는 방법을 보여줍니다. 이 기술은 크게, 뇌 손상을 감소 약물의 수동적 확산을 최소화하고 쥐 두뇌에 정확한 타겟팅을 수 있습니다.
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이 논문에서
요약
초록
뇌 실질에 Microinjections 마약, 바이러스성 벡터 또는 세포 이식을 전달하는 것이 중요 절차입니다. 주사 바늘는 궤도 도중에 생성되는 뇌 병변뿐만 아니라 두뇌가 작은뿐만 아니라 때로는 여러 개의 주사가 필요합니다 특히 마우스 두뇌의 주요 관심사입니다. 우리는 여기서 크게 뇌 손상을 감소하고 쥐 두뇌에 정확한 타겟팅을 수있는 50 μm의 루멘과 유리 모세관 바늘을 생산하는 방법을 보여줍니다. 이 방법은 작은 볼륨의 전달 (20-100 NL에서)는, 출혈 위험을 줄일 수 있도록하고, 뇌 실질 조직에 약물의 수동적 확산을 최소화합니다. 모세관 유리 튜브의 다른 크기를 사용하거나 바늘 루멘을 변경하여, 물질과 세포의 여러 종류의 주입 수 있습니다. 유리 모세관과 Microinjections는 분사 기술과 소형 설치류에 최소한의 피해 타겟팅 깊은 두뇌에 상당한 개선을 나타냅니다.
프로토콜
- 마우스 수술 전에 유리 바늘 만들기 :
- micropipette의 풀러의 모세관 유리 튜브를 넣어.
- 지역화된 영역의 유리 튜브를 부드럽게하는 유리 튜브의 가운데를 열.
- 지역화된 영역의 유리 튜브의 직경의 감소를 일으킬 수있는 충분한 초기 거리하여 세로 축을 따라 유리관을 스트레치.
- 그것이 휴식 때까지 유리 튜브를 스트레칭 유지. 이런 방식으로 두 개의 동일한 하나의 배럴의 바늘은 얻을 수 있습니다.
- microforge에 유리 바늘을 넣어. 30 ° 각도만큼 베벨 팁을하는 것입니다.
- 각각의 바늘이 정확한 내경을 가지고있는 현미경으로 확인합니다. 친수성 약물의 대부분 30-50 μm의 내경은 (그림 1) 이상적인 제품입니다.
- 유리 바늘의 넓은 끝에서 광유로 바늘을 입력합니다. 그걸로 모세관 튜브의 길이의 ~ 50 %에 도달할 때까지 미네랄 오일 (MSDS, 고양이. M7700) 모세관 현상에 의해 입력하자. 입어 높은 진공 바늘의 넓은 끝을 밀봉하는 플런저 주변 그리스 (다우 코닝, 고양이. 05054 - AB).
- 바늘의 넓은 말까지 플런저를 넣고 기름의 작은 방울이 유리 바늘 끝을 들락날락 때까지 부드럽게 미네랄 오일을 밀어. <....
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토론
방법은 두뇌에 매우 정확한 장소에 약물이나 바이러스 벡터의 대부분을 제공하는 매우 유용합니다이 비디오에서 보여주었다. 이 기술의 주요 장점 중 일부는 표적 지점, 주사의 정확성 및 뇌 병변 및 요로 손상 1, 2, 5, 6의 작은 크기의 신뢰성입니다. 일단 기술이 mistargeting의 범위 표준화되어 있어야 50 μm의 또는 2, 1 이하. 세포 이식은 또한 더 넓은, 100-150 μm의 7-9, 바늘을 사용하여 수행할 수 있습니다. 따라서 효율적인 세포 전달은 세포 이식에 의해 유도된 매우 구체적인 병변 최소화 피해로 입금하실 수 있습니다. 이 기법 세 중요한 단계가 있습니다 :
- 우리는 항상 드릴링 전에 선택한 좌표를 라벨에 인슐린 바늘로 부드럽게 머리를 긁적하는 것이 좋습니다.
- 빠르게 뇌의 표면을 침투하는 빠른 움직임으로 유리 바늘을 소개합니다.
- 최적의 깊이에 도달하면 마약이 자유롭게 두뇌에 확산하기 .......
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공개 사항
관심 없음 충돌 선언하지 않습니다.
감사의 글
OG - P는 CONACyT S 그랜트 (CB - 2008-101476)과 FRABA (10분의 686)에 의해 지원되었다. AQ - H는 건강의 국립 연구소, 하워드 휴즈 의학 연구소의 로버트 우드 존슨 재단과 메릴랜드 줄기 세포 재단에 의해 지원.
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재료
| 이름 | 회사 | 카탈로그 번호 | 댓글 |
|---|---|---|---|
| 모세관 유리관 | Wiretrol I | 5-000-1001 | |
| 마이크로피펫 풀러 | Kopf Instruments | Model 730 | |
| 마이크로포지 | World Precision Instruments, Inc. | Model 48000 | |
| 미네랄 오일 | MSDS | M7700 | |
| 고진공 그리스 | Dow Corning | 05054-AB | |
| 마취제: 2.5% Avertin | 2,2,2-tribrom–thanol + tert-amyl alcohol, 1:1 w/v | ||
| 가열 패드 | Mastex | Model 900 | |
| 정위 고정 장치 | Kopf Instruments | Model Kopf-900 | |
| 수술용 메스 날 # 15 | Medi-Cut | ||
| 마이크로 드릴 | Ideal Micro Drill | 67-1000 | |
| 정밀 핀셋 | Fine Science Tools | ||
| 1-μL 마이크로피펫 | Rainin | ||
| Parafilm M. | |||
| 수술용 현미경 | Carl Zeiss, Inc. | Contraves 시스템 탑재 Vasiorkop | |
| 마이크로 인젝터 | Narishige International | Model MO-10 |
참고문헌
- Menn, B. Origin of oligodendrocytes in the subventricular zone of the adult brain. J Neurosci. 26, 7907-7918 (2006).
- Gonzalez-Perez, O., Romero-Rodriguez, R., Soriano-Navarro, M., Garcia-Verdugo, J. M., Alvarez-Buylla, A.
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재인쇄 및 허가
