의 연결을 부상을 검사에 대한 Organotypic Hippocampal 슬라이스 문화 모델

요약

organoptypic hippocampal 슬라이스 문화 모델입니다 체외에서 모델 패러다임의 다양한 부상의 연결을 검사하는 데 사용됩니다. 이 문서에서는, 우리는 슬라이스 문화를 생성하고의 연결 부상을 quantifying위한 방법을 설명합니다.

초록

Organotypic hippocampal 슬라이스 문화의 기본 아키텍처와 해마의 구성이 상대적으로 ¹ 보존되어있는 부상의 연결 메커니즘을 검토에서 체외 방식입니다. organotypic 문화 시스템은 astrocytic의 연결 및 microglial 효과 시험은 가능하지만, 전직 생체내 준비로 주변 염증 세포의 혈액 흐름, 또는 모집의 효과를 해결하지 않습니다. 이를 위해,이 문화 방법은 자주 해마의 피라미드 뉴런에 excitotoxic 및 hypoxic 부상을 확인하는 데 사용됩니다뿐만 아니라 염증 반응을 검사하는 데 사용되었습니다. 여기에 우리는 출생 후의 쥐 두뇌에서 hippocampal 슬라이스 문화를 생성의 연결 부상을 유발하는 유해 자극을 관리하고, 시금 및 hippocampal의 연결을 죽음을 quantifying위한 방법을 설명합니다.

프로토콜

1. 준비

시작하기 전에, 필요한 수술 도구, 해부, 문화 미디어, 그리고 칠일 늙은 쥐 또는 마우스 새끼를 조립. 프로토콜은 마우스 및 쥐 준비에 대해 동일합니다.

(I) 재료 및 장비

• 운영 가위 (직선 길이 6 ", 고양이 # RS6818, Roboz, 게이 더 스버그, MD)
• 마이크로 가위, 해부 (길이 4 ', "고양이 # RS5910합니다. Roboz, 게이 더 스버그, MD)는
• 카본 스틸 더몬트 족집게 (CAT # RS - 5045.Roboz, 게이 더 스버그, MD)
• 수정 유리 "전송"pipettes (삭제 파스퇴르 피펫의 아래쪽과 가장자리 smoothed)
• Aclar 플라스틱 필름은 광장에서 (하니웰, # 812071, 포츠빌, PA) "X 2"2 컷
• 3에 의한 스폰지 4 (켄달, 고양이 # 3157, 맨스필드, MA) 커버
• 30mm Millicell 막 삽입 (0.4 μm의, Millipore, 베드 포드, MA)
• 양날 면도날 (맥일웨인 조직 헬기, Vibratome 회사, 세인트 루이스, MO)와 Mcllwain 조직 헬기
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토론

실험을 복제하면 재현할하고 일관된 결과를 보장하기 위해 수행하는 두 가지 중요한 포인트가 있습니다. 첫째, 실험 전에 12-14일에 대한 hippocampal 조각의 시대를하게하는 것이 중요합니다. 슬라이스 절연을 통해 상당한 microglial 응답이 있으며, microglia는 체외에서 ^3,6 일 10 가지를내는 발생 휴식 상태로 돌아와, 일정 기간 동안 활성 상태로 유지됩니다. 둘째, PI 형광 강도가 부상 세포의 수를 ^4로 비례 의미합니다. 선형 형광 세 시간 지점에서 측정한다 (I) T _0, NMDA 또는 ​​자연의 연결을 죽음의 기저 수준을 측정하는 OGD 자극하기 전에, (2) T _24, 또는 24 시간 NMDA 또는 ​​OGD 또는 다른 자극과 자극 후 그리고 (iii) T _{맥스에서의} 연결을 죽음의 최대한의 금액을 생산하는 10 μm의 NMDA와 함께 24 시간 야간 치명적인 치료와 조각의 최종 치료.......