파킨슨병은 살충제에 대한 노출과 관련된되었습니다. 여기서 우리는 원하는 농도와 장용 신경계의 알파 synuclein의 축적에서 효과를 분석하는 방법에 위장 튜브를 사용하는 살충제를 전달하는 방법을 보여줍니다.
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방법 논문
장용 신경계의 알파 synuclein의 흠도의 Gavage 및 이미지 분석을 사용하여 Rotenone의 구강 관리
이 논문에서
요약
초록
파킨슨병 (PD) 환자에서 연관된 병리 인터 알리아 장용 신경계 (팔) 1,2, 후각 망울 (OB), 미주 (DMV) 3 등의 모터 핵, intermediolateral 관련된 특성 패턴을 따릅니다 척수 4와 substantia 니그라의 핵, 4,5 질병의 neuropathological 준비를위한 기초를 제공합니다. 팔과 OB가 가장 노출된 신경 구조와 영향을 가장 먼저 사람입니다. 흥미롭게도, PD는 농약 노출 6-8 관련된되었습니다. 여기 세부에서 우리의 이전 연구 9에 사용되는 두 가지 방법을 보여줍니다. 팔에서 로컬로 연기 rotenone의 효과를 분석하기 위해, 우리는 한 세 C57/BL6 마우스로 gavage를 사용하여 rotenone을 관리. Rotenone 강력 mitochondrial 복잡한에게 I 10을 억제 널리 사용되는 살충제이다. 그것은 매우 lipophylic과 저조한 위장관 11 흡수됩니다. 우리의 결과는 5 MG / rotenone의 kg의 행정부가 mitochondrial 복잡한 I 근육이나 두뇌의 활동을 억제하지 않았 것으로 나타났다. 따라서, 우리의 관리 방법 rotenone을 사용하면 hepatoportal 시스템을 교차하지 않았고 오직 팔에 행동 것을 제안. 여기서 우리는 엔터 프라이즈 네트워크에 알파 synuclein의 축적에 살충제의 효과를 분석하는 데 사용하는 gavage 및 이미지 분석 프로토콜을 사용하여 살충제를 관리하는 방법을 보여줍니다. 첫 번째 부분은 원하는 정확한 농도의 살충제 (rotenone)의 intragastric 관리를 허용하는 방법을 보여줍니다. 두 번째 방법은 이미지 분석 소프트웨어를 사용하여 엔터 프라이즈 네트워크에 알파 synuclein의 축적을 분석 반자동 이미지 분석 프로토콜을 보여줍니다.
프로토콜
Rotenone 1) Intragastric 관리
- 동물의 무게를.
- 필요한 rotenone / 자동차 솔루션의 전체 볼륨을 계산합니다. 동물 중량 g 당 이러한 경우에는 0.01 ML.
- 이전에 계산 rotenone 솔루션의 볼륨 (0.625 MG / ML rotenone, 4 % carboxymethylcellulose 및 1.25 %의 클로로포름) 또는 차량 용액 (4 % carboxymethylcellulose 및 1.25 %의 클로로포름)와 1 ML의 주사기를 부과합니다. 이 경우는 5 MG / kg rotenone 선량에 해당합니다.
- 마우스를 들고, 한 손으로 마우스의 꼬리를 들고, 다른 한편의 첫 번째와 두 번째 손가락으로 당겨 목 피부를 스트레칭.
- 머리가 두 손가락 사이에 고정되면, 손바닥에 대해 그것을 엎드려서 거꾸로 그것을 켜십시오. 네 번째와 다섯째 손가락을 사용하여 꼬리를 수정.
- 뒤로 향해 머리를 유지, 마우스의 입을 열 미각을 누르십시오. 부드럽게 입안에 gavage을 소개합니다. gavage 바늘이 아닌 일반 바늘을 사용하는 것이 중요합니다. 천천히, 멀리 위 방향으로 gavage 이동합니다. 이것은 폐에 받고 자료를 막을 수있을 겁니다.
- 부....
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토론
Intragastric 관리는 이전에 12을 수행하고 있습니다. 그러나, 0.5 % carboxymethylcellulose 나트륨 소금 (CMSS) 혼자 인덴의 원고에 따르면, rotenone가 실시되었다 해산. Rotenone는 높은 liphophylic 물질입니다. 따라서, rotenone 혼자 0.5 % CMSS에 녹아 수 없습니다 그래서 할 경우에는 침전됩니다. 클로로포름의 사용은 강수량을 피한 균등하게 분산 rotenone 서스펜션을 만듭니다. 또한, CMSS에서 살충제의 높은 농도로 인해, 관리 솔루션의 최종 볼륨도 크게 감소합니다. 따라서 행정의 합병증을 감소.
우리는 곧장 gavages의 사용을 권장합니다. 마우스의 식도는 직접 복부의 한쪽 끝, 직선이다. 따라서, 직선 gavages이 작업을 위해 더 적합합니다.
공촛점 이미지의 이미지 분석 피지 소프트웨어를 사용하여 이루어졌다. 본 소프.......
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공개 사항
프란 시스코 판 - Montojo이 동물 모델 (신청 번호 PCT / EP 2009/005688)에 대해 보류중인 특허 출원 있습니다.
감사의 글
페드로 드 라 바리 마자 재단은이 작품을지지했습니다.
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재료
| 이름 | 회사 | 카탈로그 번호 | 댓글 |
|---|---|---|---|
| Rotenone | Sigma-Aldrich | R8875 | 독일 |
| 클로로포름 | Carl Roth GmbH | 3313.1 | 독일 |
| 카르복시메틸셀룰로오스 | Sigma-Aldrich | C5678 | 독일 |
| 가바지 튜브 1.2 mm x 60 mm | Unimed | 스위스 | |
| LSM 510 | Carl Zeiss, Inc. | ||
| FIJI | http://pacific.mpi-cbg.de |
참고문헌
- Braak, H., de Vos, R. A., Bohl, J., Del Tredici, K., K, Gastric alpha-synuclein immunoreactive inclusions in Meissner's and Auerbach's plexuses in cases staged for Parkinson's disease-related brain pathology. Neurosci Lett. 396, 67-72 (2006).
- Wakabayashi, K., Takahashi, H., Ohama, E., Ikuta, F.
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재인쇄 및 허가
