특발성 질환에 적응 면역의 미생물 목표 식별은 효소 연결된 immunospot 분석을 사용하여 수행할 수 있습니다.
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방법 논문
효소 링크된 Immunospot 분석 (ELISPOT) : 미생물 항원 반대 예뻐 - 1 세포 면역 반응의 부량
* These authors contributed equally
이 논문에서
요약
초록
적응성 면역은 세포 내 병원균의 통관하는 중요한 구성 요소입니다. 인간이 반응을 감지하고 계량하는 능력은 중요한 진단 도구입니다. 효소 링크된 immunospot 분석 (ELISPOT)는 등 HIV 감염, 이식있는 사람으로 immunosuppressed 인구 및 스테로이드 사용을 포함한 미생물의 항원, 세포 면역에 대한 답변을 식별하는 능력에 대한 인기를 얻고있다. 이 분석은 면역 특정 미생물 항원에 대한 반응뿐만 아니라, 이러한 반응은 성격 Th1 또는 Th2 경우에는 구별을 계량하는 능력이 있습니다. ELISPOT은 염증의 사이트에 국한되지 않습니다. 그것은 주변 혈액뿐만 아니라 bronchoalveolar 세척, 대뇌 척수, 그리고 복수와 같은 적극적인 참여의 사이트 내에서 면역 반응에 대한 평가 능력에 다재 다능한 것입니다. 단일 또는 여러 항원에 대한 면역 반응의 검색이 가능합니다뿐만 아니라, 미생물 단백질 내의 특정 epitopes. 이 분석은 시간이 지남에 따라 면역 반응의 검출뿐만 아니라 호스트 T 세포에 의해 인식 항원의 구분을 용이하게합니다. 듀얼 컬러 ELISPOT assays의 두 크린 시토킨의 동시 표현의 검색이 가능합니다. 이 기술에 대한 최근의 애플 리케이션 extrapulmonary 결핵의 진단뿐만 아니라 면역 질환 감염성 항원의 공헌에 대한 조사를 포함합니다.
프로토콜
다음과 같은 프로토콜을 위해, 우리는 관심의 세포로 말초 혈액 mononuclear 세포 (PBMC)를 사용합니다. 그러나,이 프로토콜은 다른 세포 유형에 사용할 수 있습니다. 무균 기술을 사용하여 조직 문화 후드에서 분석을 수행합니다.
1 일 : 플레이트와 셀의 준비
- ELISPOT 플레이트를 타고 후드에서 엽니다.
- 가능한 경우, 별도로 하나의 잘 pipetting가 수용되어 다채널 pipettor를 사용 1X PBS 150 μL와 접시에게 3 번 씻으십시오.
- 저수지의 패키지를 꺼내서 후드에서 엽니다.
- 2 μg / ML 캡처 항체의 안티 - 인간 인터페론 - γ, 11 1X PBS의 MLS. 추가 잘 와동. 저수지에 항체 믹스를 전송합니다.
- 각 잘 다중 채널을 사용에 코팅 용액 100 μL를 놓습니다.
- parafilm의 접시를 넣어.
- 하룻밤 냉장고에 접시를 놓습니다. 번호판 주간 좋다. 엄지의 규칙은 우물에 액체가 남아 아직도있다면 접시가 사용될 수있다는 것입니다.
셀 준비
P....
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토론
ELISPOT 분석은 인간의 면역 반응을 모니터링하는 가장 중요하고 널리 사용 assays의 하나로서 등장과 다른 종의 다양한 있습니다. ELISPOT 분석과 함께, 면역 세포 주파수는 세포 집단의 확장이나 조작없이 단일 세포 수준에서 측정할 수 있습니다. ELISPOT 분석 널리 감염증, 암, 알레르기 및 면역 질환 등 다양한 질병의 항원 특정 면역 반응을 조사하기 위해 적용되었습니다. 이 분석의 응용 프로그램은 크게 항원 특정 세포의 부량 중요한이나 항생제 치료 1 일 이전이나 이후 결핵 등 다양한 질병 상태에서 특정 항원에 대한 면역 반응의 비교는 연구에 적용되었습니다. 그러나, 최근의 보고서는이 같은 분석은 ascitic 유체, 대뇌 척수 또는 bronchoalveolar 세척과 같은 절연 재료 세포 내에서 항원에 특정한 T 세포의 주파수를 감지하는 데 사용할 수있는 것으로 나타났습니다. 성 - 한 김 동부 표준시. 알. 복부 결핵 의심 환자에서 PBMCs에서 ELISPOT 분석을 사용하여, 적극적인.......
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공개 사항
관심 없음 충돌 선언하지 않습니다.
감사의 글
연구 자원, 보건 국립 연구소를위한 국립 센터에서 밴더빌트 CTSA 부여 한 UL1 RR024975에 의해 부분적으로 지원. 이 작품은 NIH R01 HL 83839에 의해 투자되었다; R01 AI 65,744합니다.
....액세스가 제한되었습니다. 이 콘텐츠를 보려면 로그인하거나 체험판을 시작하세요.
재료
미디어 A. 준비
트리스 버퍼의 B. 준비
- 1 L의 비커에 ddH 2 O 800 ML을 추가합니다.
- 트리스의 12g를 측정하여 비커에 추가할 수 있습니다.
- 비커에 : 마그네슘 염화 hexahydrate의 0.12 g (6H 2 O MgCl 2) 추가합니다.
- 자동 교반 접시에 자석 교반 막대로 저어.
- 일단 9.5에 대한 솔루션은 산도, 해산.
- 1000mL로를 데리고, 비커에 ddH 2 O 200 ML을 추가합니다.
- 0.22 μm의 필터와 솔루션을 필터링합니다.
ELISPOT 분석에 필요한 C. 재료 :
참고문헌
- Dosanjh, D. P., Hinks, T. S., Innes, J. A., Deeks, J. J., Pasvol, G., Hackforth, S., Varia, H., Millington, K. A., Gunatheesan, R., Guyot-Revol, V., Lalvani, A. Improved diagnostic evaluation of suspected tuberculosis. Ann Intern Med. 148, 325-336 (2008).
- Sung, H. K. E.
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재인쇄 및 허가
