이 동영상은 호기성 곰팡이로 리그노셀룰로오스성 식물 조직의 저하를 연구하기위한 통제된 환경의 접근 방식을 보여줍니다. 영양 소스 및 습기를 제어하는 능력은 한천 블록 microcosms의 주요 장점이지만, 그 접근 방식은 종종 혼합 성공을 산출. 우리는 재현성, 낮은 다양성의 결과를 얻을 수에 중요한 함정을 해결합니다.
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방법 논문
에어로빅 곰팡이에 의해 제어 플랜트 조직 분해에 대한 한천 - 블럭 Microcosms
* These authors contributed equally
이 논문에서
요약
초록
리그노셀룰로오스성 식물 조직의 곰팡이 biodegradation를 공부에 대한 두 가지 주요 방법은 목재 방부제 테스트 (; 한천 블록 토양 블록)에 대한 개발되었습니다. 이것은 토양 블록 microcosms 높은 붕괴 속도, 적은 수분 문제, 연구 중 낮은 다양성, 그리고 방부제의 독성 높은 임계값을 얻을 것을 잘 허용됩니다. 토양 블록 테스트 따라서 더 활용 기법이며, 테스트 및 재료에 대한 미국 사회 (ASTM) (방법 D 1413-07)에 의해 표준화되었습니다. 토양 블록 디자인은 로컬 변수 토양 소스를 사용하지만, 단점을 가지고 있으며, 썩어 조직에 영양분을 외부 (외인성)의 통제를 제한 인치 이러한 단점은 다른, 점점 인기를 연구 목적으로이 방법을 적용의 문제로 등장했습니다. 이러한 현대의 목적은 네트워크 hyphal 함께 산화 메카니즘 및 추적 translocated 요소를 평가 공동 대사 toxics의 bioremediation 테스트 bioenergy 연구를위한 굴욕 lignocellulosics를 포함. 토양 - 블록은 이러한 응용 프로그램에 충분한 제어를 빌려하지 않습니다. 정제 한천 블록 접근 방식이 필요합니다.
여기, 우리는 나무 저하 곰팡이 Serpula lacrymans은 낮은 칼슘 한천과 함께 깊은 배양 접시를 이용하여 한천 블록 microcosms의 나무이 저하될 수있는 갈색 썩음을 사용합니다. 우리는 유틸리티 및 예상 다양성을 설명하는 시간 시리즈 부패에 대한 외인성 석고의 역할을 테스트합니다. 싱글 보드 격랑 (세로 컷)에서 블록은 냉방 무게, autoclaved, 플라스틱 메쉬 위에 무균 소개하고 있습니다. 외인성 석고는 인터페이스에서 추가로 곰팡이 예방 접종, 각 블록 얼굴을하고 있습니다. 수확은 최종 파괴 추수 때까지 무균 수 있습니다. 이러한 microcosms은 한천이나 배양 접시의 벽 블록 접촉을 피하기 위해 설계되었습니다. 결로는 접시 쏟아 도중 부화하는 동안 최소화합니다. 마지막으로, inoculum / 석고 / 목재 간격은 있지만 접촉을 허용하지 않고 최소화됩니다. 한천 블록 디자인이 덜 기술적인 관점은 또한 오류 및 연구 사이에 변화의 핵심 소스의 가장 흔한 원인입니다. 비디오 간행물이 경우에 따라서 유용합니다, 우리는 낮은 다양성, 높은 품질의 결과를 보여줍니다.
프로토콜
이 프로토콜은 물론 오븐이나 공기 건조 소재로로 설명, 우디 및 비 - 우디 기판에 적용됩니다. - 설정하기 전에, 그러나, 먼저 프로토콜을 통해 읽어보십시오. 여러 학업에 적용할 수 제기된 점, 이러한 포인트 (밑줄) 계획 필요가 있습니다. 또한, 우드 보호에 관한 국제 연구 그룹 (IRG - WP) 용기 (1978)에 의해 제출된 논문 따라 간혹 사용되는 두 출판 한천 블록 방식, 영국 표준 838 하나가 또있다는 것을 유의하십시오. 우리는 주로 소우주 디자인과 한천 배지의 컨트롤에 수정, 방법 838과 유사하지만, 다시 두 가지 접근법은 종종 산소 결핍과 변화를 일으키는, 나무 블록 역사 수분 관리 문제로 인해 피할 수 있습니다. 838 표준을 포함하여 한천 블록 디자인의 논의를 포함하고 이러한 검사 방법의 좋은 검토는, 니콜라스 (1973)에서 찾을 수 있습니다.
1) Microcosms 준비
이 실험에 대한 Microcosms 나무 블록 위에 머리 공간을 증가, 전형적인 배양 접시보다 1cm 키가 (깊이)입니다. 그들은 그들의 농도 이외에, 절대적인 영양소 금액을 제어하고, 잘 거리 (> 3mm) 뚜껑의 나무 블록을 유지하기 위해 한천의 겸손한과 정확한 금액으로 가득합니다. 석고....
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토론
우리 한천 블록 설정 (그림 1)를 사용 Serpula lacrymans은 (그림 3 제어 갈색 - 부패 소나무 블록에 60 % 이상의 체중 감소로 이어지는, 석고 표면과 나무 블록 (그림 2)에 직접 접촉하는 성장 ). 이것은 쉽게> 50 %의 부패의 ASTM 표준 목표를 만족하고,에서 부패에 변화의 평균 계수 (C V)는 주 16 0.055했다. 이 데이터는 실링 7 게시됩니다. 다시 다른 곰팡이는 토양 블록보다 한천 블록에서 더 이상 부화가 필요합니다. 참고로, 우리는 성공적으로 자주 외인성와 연결을 확인하는 전자 흩어지는 분광법 (SEM - EDS) 및 유도 결합 플라즈마 분광법 (ICP - 관한 것)과 전자 현미경을 스캔 사용하는 다른 곰팡이 종의 다양한 여러 과거의 실험에서 유사한 디자인을 실행 기판과 나무 8,9에 칼슘 및 다른 요소의 translocation.
낮은 다양성뿐만 아니라.......
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공개 사항
관심 없음 충돌 선언하지 않습니다.
재료
| 이름 | 회사 | 카탈로그 번호 | 댓글 |
|---|---|---|---|
| 페트리 접시 | Nalge Nunc international | 4014 | 25 x 150 mm |
| 한천, Type A | Sigma-Aldrich | A4550 | |
| 질산 암모늄, NH4NO3 | Millinckrodt | 3436-12 | |
| 인산 칼륨, KH2PO4 | JT Baker | 3246-01 | |
| 황산 마그네슘 7-수화물, MgSO4•7H2O | Sigma-Aldrich | 230391 | |
| D-(+)-포도당 | Sigma-Aldrich | G8270 | 덱스트로스 |
| 붕산, H3BO4 | Mallinckrodt Baker Inc. | 2549-04 | |
| 황산 아연 7-수화물, ZnSO4•7H2O | Mallinckrodt Baker Inc. | 8880-12 | |
| 염화 망간 4-수화물, MnCl2•4H2O | JT Baker | 2540-04 | |
| 황산 구리(II) 5-수화물, CuSO4•5H2O | Sigma-Aldrich | 209198 | |
| 헵타몰리브데이트 암모늄 4-수화물, (NH4)6Mo7O24•4H2O | Sigma-Aldrich | 431346 | |
| 염화 칼슘 이수화물, CaCl2•2H2O | Mallinckrodt Baker Inc. | 4160-12 | |
| 염화 나트륨, NaCl | Mallinckrodt Baker Inc. | 7581-12 | |
| 황산 철 7-수화물, FeSO4•7H2O | Mallinckrodt Baker Inc. | 5056-12 | |
| Pipet-aid | Drummond Scientific | 4-000-110 | 무선 표면을 EtOH로 닦아냄 |
| 10 ml 멸균 폴리스티렌 피펫 | BD Biosciences | 357551 | |
| 거터 가드(Gutter Guard) | Thermwell Products Co. | VX620 | 비누로 사전 세척함 철물점 구매 |
| 황산 칼슘 반수화물, CaSO4•0.5H2O | Acros Organics | 385355000 | |
| #4 코르크 보러 | Boekel Scientific | 1601 | |
| Parafilm "M" | Pechiney Plastic Packaging | PM-996 |
참고문헌
- ASTM D1413-07. Standard test method for testing wood preservatives by laboratory soil-block cultures. . Annual Book of ASTM Standards. , 185-192 (2007).
- Bravery, A. F. A miniaturized wood block for the rapid evaluation of wood preservative fungicides. , International Research Group on Wood Protection (IRG/WP 2113). (1978).
- Low, G. A., Young, M.....
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