인간 폐 조직에서 박테리아 위치 및 숙주 상호작용 영상

Abstract

출처: Mills, B. 외, 공초점 레이저 내시경을 이용한 외부 체외 인간 폐 조직에서 새로운 박테리아 특이 탐침의 광학 스크리닝. J. Vis. 경험 (2017)

이 영상은 섬유 공초점 형광 현미경을 이용해 부탁 및 폐 조직 내 형광포 도상구 균을 실시간으로 영상화하는 과정을 시연합니다.

Protocol

1. 공초점 레이저 내시경(CLE)을 이용한 데이터 수집
   1. 설정 후 저장 위치와 파일 접두사를 선택할 수 있는 창이 열립니다. 데이터 저장할 폴더를 선택한 후, 그에 맞는 접두사 이름을 붙이세요.
   2. 발 페달은 조작자가 쉽게 접근할 수 있도록 배치하세요. 왼쪽 페달: 레이저 온/오프; 센터 페달: 일시정지; 오른쪽 페달: 녹음/정지.
      참고: 레이저 조작은 화면 조작을 통해서도 접근할 수 있습니다.
   3. 화면에서 '시작'을 클릭하거나 왼발 페달을 눌러 레이저를 켜세요. 이 장치는 100% 레이저 출력과 12프레임/초(기본 설정)의 프레임 속도를 사용하여 이미지를 획득하고 획득할 수 있습니다.
      참고: 다른 용도에서는 샘플 종류에 따라 화면에서 이 설정을 변경할 수 있습니다.
   4. 각 박테리아 현탁 샘플을 영상으로 찍어라.
      1. FCFM(섬유 공초점 형광 현미경) 영상 섬유의 원위 끝을 삽입하고, 섬유를 현탁 부유액 안으로 천천히 이동시켜 샘플을 조사합니다.
      2. 오른발 페달을 누르거나 화면 녹화 버튼을 선택하면 최대 10분까지의 영상을 녹화할 수 있습니다. 이는 섬유가 샘플 주위를 천천히 움직이는 방식입니다.
      3. 샘플 사이에 8% H₂O₂ 와 렌즈 세척 조직으로 FCFM 영상 섬유의 원위 끝을 청소하세요. ​
         참고: 일반적인 비디오 길이는 10-30초로도 시험관 내 영상 촬영에 충분합니다.
   5. 폐 조직 샘플 하나하나를 영상으로 찍어.
      1. FCFM 영상 섬유의 원위 끝을 샘플에 삽입하여 섬유 끝과 조직 간 직접 접촉을 보장합니다. 영상 섬유 끝을 부드럽게 움직여 샘플을 조사하세요.
         참고: 섬유 끝을 조직에서 멀리 들어 올리면 조직이 초점면에서 제거됩니다; 하지만 이 방법은 조직에 부착되지 않은 라벨이 붙은 박테리아를 영상화하는 데 사용될 수 있습니다.
      2. 오른발 페달을 누르거나 화면 녹화 버튼을 선택하면 최대 10분까지의 영상을 녹화할 수 있습니다. 이는 섬유가 샘플 주위를 천천히 움직이는 방식입니다.
         참고: 일반적으로 30초 영상 길이면 조직 체외 영상 촬영에 충분합니다.
      3. 렌즈 세척 조직과 샘플 사이에 8% H₂O₂ 로 FCFM 영상 섬유의 원위 끝을 청소하세요.

Materials

List of materials used in this article

Name	Company	Catalog Number	Comments
1-14 마이크로퓨지	사이퀴프	90616	소형 벤치탑 마이크로 원심분리기
96웰 플레이트	코닝	3370	분석 판
칼세인 AM	시그마 올드리치	17783	상업용 형광염료
셀비지오 488nm 연구 CLE	마우나케아 테크놀로지스	LC-0001-488	공초점 레이저 내시경 장치
클레톱-S	클레톱	14110601	섬유 클리너
에펜도르프 (1.5 mL)	에펜도르프	30120086	1.5 mL 마이크로퓨지 튜브
깁코 인산염 완충 식염수	써모피셔 사이언티브	10010023	PBS - 워시 미디어
IC-뷰어	마우나케아 테크놀로지스	LW-0001	연구 CellVizio 488nm 시스템을 위한 데이터 수집 및 처리 소프트웨어
비표준 연구 AlveoFlex 488 nm	마우나케아 테크놀로지스	MP-0002-AF3	섬유 공초점 형광 현미경 섬유
퀀티 키트 488 nm	마우나케아 테크놀로지스	LQ-0005	CellVizio 488 시스템 보정 키트
S. aureus ATCC 25923	ATCC	25923	이 연구에서 사용된 박테리아 균주
세미세 분광광도측정 큐벳	시그마 올드리치	C5416-100EA	분광광도측정을 위해
열믹서 편의	에펜도르프	41102422	흔들림이 있는 벤치탑 히터