세포 내 박테리아 군집을 포함하는 마우스 방광 상피 세포 분리

초록

출처: 양, E. 외. 요로 감염의 쥐 모델에서 생성된 단일 세포 내 박테리아 군집의 분리, 즉 단일세포 분석을 위한 연구. J. Vis. 경험 (2019)

이 영상은 감염된 마우스 방광에서 세포 내 박테리아 군집을 포함하는 단일 상피세포를 입 마이크로피펫팅을 이용해 수동 분리하는 과정을 시연하여, 요로 감염 모델에서 생존 가능한 숙주 관련 대장균 집단의 하위 단일 세포 분석을 가능하게 합니다.

프로토콜

동물 모델이 포함된 모든 절차는 지역 기관 동물 관리 위원회와 JoVE 수의학 심사 위원회에서 검토되었습니다.

1. 세포 내 박테리아 군집(IBC) 분리: IBC의 입 피펫팅

참고: 이 절에서 설명하는 모든 방법은 기관 위험 평가를 거쳤습니다. 입 피펫 사용은 전달되는 용액을 섭취할 위험이 내포되어 있습니다. 이 위험은 이 프로토콜이 사용하는 나노리터 용량으로 대체되며, 프로토콜 사용자분들은 여기와 토론에 명시된 예방 및 실무 지침을 반드시 준수하시길 권장합니다.

1. 세포를 PBS(인산 완충 식염수)에 긁어낸 후, 구강 마이크로피펫팅 장치를 설치합니다(그림 1C).
   1. 당겨진 유리 모세관의 두꺼운 쪽(뽑히지 않은 쪽)을 흡입기 튜브의 고무 플러그(흰색 끝)에 삽입합니다.
   2. 1 mL 피펫 팁의 좁은 끝을 흡입관 다른 쪽(빨간색) 끝에 삽입하여 꽉 맞게 합니다.
   3. 2 mL 흡입 피펫의 좁은 끝을 1 mL 피펫 팁의 넓은 열린 끝에 삽입하여 다시 한 번 꽉 맞게 합니다.
      참고: 이 장치는 연구자가 흡입 피펫의 넓고 열린 끝에서 입으로 피펫을 사용하여, 장치 반대편 모세관 좁은 ....

결과

그림 1: 방광 세포에서 IBC 채취. (A) 세포 긁기 전에 차가운 PBS 용액에 감염되고 뒤집힌 방광. (B) 현미경으로 본 긁힌 방광 세포의 이미지. IBC는 두 이미지 모두에서 큰 녹색 형광 집합체로 식별할 수 있습니다(빨간 화살표 참조). (C) 완성된 입 마이크로피펫팅 장치의 이미지입니다. 흡인용 피펫, 피펫 팁, .......

재료

이 논문에 사용된 재료 목록

이름	회사	카탈로그 번호	댓글
1 mL 투버쿨린 주사기	BD 생명과학	302100
흡입 피펫	BD 생명과학	357558
흡입관	시그마-올드리치	A5177
현미경용 디지털 카메라	올림포스	DP71	IBC의 이미지 캡처 및 수확을 위해. GFP 채널이 있는 다른 형광 현미경이면 충분합니다
유리 모세관	키맥스	6148K07
아이리스 가위 STR SS 110MM	브라운	BC110R
현미경용 광원 장치	올림포스	LG-PS2	IBC의 이미지 캡처 및 수확을 위해. GFP 채널이 있는 다른 형광 현미경이면 충분합니다
거시 형광 현미경	올림포스	MVX10	IBC의 이미지 캡처 및 수확을 위해. GFP 채널이 있는 다른 형광 현미경이면 충분합니다
마이크로피펫 + 마이크로피펫 팁			정적 박테리아 배양 및 OD 측정을 위한
PBS(인산염 부퍼 생리식염수) 1회			정적 박테리아 배양 및 OD 측정을 위한
폴리에틸렌 튜빙	BD 인트라메딕	427401
스테릴린 90mm 표준 페트리 접시	열학	101VR20	멸균된 페트리 접시라면
스티븐스, 혈관 및 힘줄 가위, 곡선형, 섬세함, 110mm	브라운	OK366R	방광 채취에 권장
수술용 가위 STR S/B 105MM	브라운	BC320R
탁상용 원심분리기	에펜도르프	5810R	15ml 원뿔형 원심분리기를 냉장 보관하는 모든 것이요